【摘 要】
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目的:用重组鸡痘病毒表达中国流行株HIV-1Gag-gp120融合蛋白.方法:在以鸡痘病毒282E4株为基础构建的重组表达质粒pUTAL的ATI-P7.5复合启动子下游,插入编码中国流行株HIV-1Gag
【机 构】
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解放军军需大学,浙江大学免疫学研究所,,白求恩医科大学地方病研究所,
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目的:用重组鸡痘病毒表达中国流行株HIV-1Gag-gp120融合蛋白.方法:在以鸡痘病毒282E4株为基础构建的重组表达质粒pUTAL的ATI-P7.5复合启动子下游,插入编码中国流行株HIV-1Gag-gp120嵌合基因,构建了重组表达质粒pUTALGP.重组质粒与FPV共转染CEF细胞,进行了同源重组.通过PUdR加压筛选,X-gal染色,获得重组鸡痘病毒vUTALGP.结果:经Western blot检测表明,重组病毒表达了Gap-gp120融合蛋白,其分子量分别为110×103、69×103、48×103、24×103.电镜观察可见Gag蛋白在CEF细胞中形成的反转录病毒样粒子.重组病毒免疫小鼠,能够诱导HIV-1特异的血清抗体反应.结论:重组鸡痘病毒成功的表达了Gag-gp120融合蛋白,并进行了正确的加工.
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