【摘 要】
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目的探讨长链非编码RNA钾电压门控通道亚家族Q成员1反向转录物1(KCNQ1OT1)在骨肉瘤顺铂(DDP)耐药发生中的作用及机制。方法采用荧光定量聚合酶链反应(qPCR)方法检测KCNQ1OT1在亲代细胞及耐药细胞中表达。针对长链非编码RNA-KCNQ1OT1基因序列体外合成小干扰RNA(siRNA)，脂质体法将siRNA转染至人骨肉瘤细胞，采用WST-1检测两组细胞顺铂半数抑制浓度(IC50)，
【机 构】
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重庆医科大学附属儿童医院肿瘤外科 儿童发育疾病研究教育部重点实验室 儿童发育重大疾病国家科技合作基地 儿科学重庆市重点实验室 400014,重庆医科大学附属儿童医院肿瘤外科 儿童发育疾病研究教育部重点
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目的探讨长链非编码RNA钾电压门控通道亚家族Q成员1反向转录物1(KCNQ1OT1)在骨肉瘤顺铂(DDP)耐药发生中的作用及机制。
方法采用荧光定量聚合酶链反应(qPCR)方法检测KCNQ1OT1在亲代细胞及耐药细胞中表达。针对长链非编码RNA-KCNQ1OT1基因序列体外合成小干扰RNA(siRNA)，脂质体法将siRNA转染至人骨肉瘤细胞，采用WST-1检测两组细胞顺铂半数抑制浓度(IC50)，Transwell小室检测干扰KCNQ1OT1后对肿瘤迁徙及侵袭的影响情况，实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)检测上皮-间质转化(EMT)相关分子的表达。所有结果采用GraphPad Prism 7.0(GraphPad Software Inc，La Jolla，CA)及SPSS 22.0软件(SPSS，Chicago，IL，USA)处理。Student’s t检验进行统计分析。
结果骨肉瘤顺铂耐药细胞MG63/DDP及143B/DDP的IC50值分别为(17.960±0.153)、(7.725±0.183) μmol/L，显著高于亲代细胞的IC50值[(5.074±0.159)、(2.633±0.219) μmol/L，t＝101.148、30.903，P<0.01]。MG63顺铂耐药细胞株(MG63/DDP)和143B顺铂耐药细胞株(143B/DDP)中KCNQ1OT1的相对表达量分别为6.830±0.105、6.284±0.465，与亲代细胞比较(3.081±0.167，2.014±0.216)，差异有统计学意义(t＝22.917、11.722，P<0.01)。干扰KCNQ1OT1表达后可抑制骨肉瘤细胞143B/DDP迁移及侵袭能力，WST-1检测干扰KCNQ1OT1后MG63/DDP及143B/DDP的IC50值分别为(8.363±0.089)、(3.947±0.093) μmol/L，与耐药细胞株比较，差异有统计学意义(t＝－93.911、－31.878，P<0.01)。耐药细胞比较亲代细胞钙黏附蛋白E(E-cadherin)表达下调，钙黏附蛋白N(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、Slug表达上调，干扰KCNQ1OT1后，耐药细胞的E-cadherin表达上调，N-cadherin、Vimentin、Slug表达下调。
结论KCNQ1OT1可能通过调控EMT促进骨肉瘤耐药进程发生。
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