【摘 要】
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目的 优化扩增武汉地区HCV 1b型患者HCV非结构蛋白3(NS3)的cDNA,并进行测序.方法 从患者血清中提取HCV RNA,采用型特异性引物扩增分型法检测HCV患者基因分型.设计3对外侧引物
【机 构】
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430030 武汉 华中科技大学同济医学院附属协和医院感染科同济医学院附属同济医院急诊科;同济医学院附属同济医院临床免疫研究室;430030,武汉 华中科技大学同济医学院附属协和医院感染科;
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目的 优化扩增武汉地区HCV 1b型患者HCV非结构蛋白3(NS3)的cDNA,并进行测序.方法 从患者血清中提取HCV RNA,采用型特异性引物扩增分型法检测HCV患者基因分型.设计3对外侧引物和3对内侧引物,采用套式PCR技术(方案一)分别扩增HCV1b型患者的HCV NS3 3个区段,然后用3对内侧引物进行测序.为了优化NS3扩增和测序效果和减少操作繁琐,对引物进行改进,设计1对外侧引物和1对内侧引物,采用改进的套式PCR技术(方案二)直接扩增HCV 1b型患者的HCV NS3区,然后用3个正向引物和1个逆向引物进行测序.结果 改进的套式PCR技术(方案二)与套式PCR技术(方案一)相比,操作较为简单,而且扩增效率增高,扩增效果较好.结论 采用改进的套式PCR技术(方案二)扩增和测序HCV NS3区更迅速、有效、实用.
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