【摘 要】
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目的:构建结核分枝杆菌(MTb)1hp-esat6融合基因及其原核表达载体并进行表达.方法:用Gene SOEing法,将1hp基因和esat6基因体外重组,构建融合基因,克隆入pQE30质粒中进行表达.
【机 构】
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重庆医科大学基础医学院微生物学教研室,重庆,400016
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目的:构建结核分枝杆菌(MTb)1hp-esat6融合基因及其原核表达载体并进行表达.方法:用Gene SOEing法,将1hp基因和esat6基因体外重组,构建融合基因,克隆入pQE30质粒中进行表达.结果:构建的融合基因经测序证实完全正确,重组体转化表达菌DH5α后,经过IPTG诱导,表达出26kDa左右的CFP10-ESAT6融合蛋白.SDS-PAGE分析显示,IPTG诱导4h表达量最高,表达蛋白以可溶性非包涵体形式存在于胞浆中,表达量占全菌蛋白质的40%,Western blotting证实其有良好的抗原性.表达蛋白经过Ni-NTA柱纯化后,获得了纯度为98%的重组蛋白.结论:成功构建MTb 1hp-esat6融合基因,成功构建原核表达载体pQE30-CFP10-ESAT6,并获得重组CFP10-ESAT6融合蛋白,为MTb重组抗原的应用奠定了基础.
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