干血滴中染色体外疟原虫DNA的PCR扩增及测序

来源 :国外医学(寄生虫病分册) | 被引量 : 0次 | 上传用户:TSSSSSS
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作者从干血滴中直接用PCR扩增线粒体外原虫cDNA,为研究基因提供了方便的手段,并首次对来自不同地区的P.f.、P.v.、P.m.的LSU-rRNA基因进行了分析。 指尖(5—10μl)或静脉采集镜检恶性疟、间日疟、三日疟原虫阳性血样及阴性对照血样,并转移到Whatman滤纸上。将单个滤纸干血滴放入200μl的PCR管中,用甲醇固定5分钟后,倾弃甲醇并在PCR扩增前使血滴完全干燥。100μl的反应体系中含1×PCRbuffer(70 mmol/L Tris,pH8.8,20mmol/L The authors used direct PCR amplification of mitochondrial DNA from dry blood droplets to provide a convenient means of studying the genes and analyzed LSU-rRNA genes from P.f., P.v., and P.m. from different regions for the first time. Fingered (5-10 μl) or venous samples were collected for the detection of Plasmodium falciparum, Plasmodium vivax, Plasmodium malaria positive and negative control blood samples and transferred to Whatman filter paper. A single filter paper dry blood drop was placed in a 200 μl PCR tube, fixed with methanol for 5 minutes, the methanol was discarded and the blood droplet was completely dried before PCR amplification. 100 μl of the reaction solution contained 1 × PCR buffer (70 mmol / L Tris, pH 8.8, 20 mmol / L)
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