pVVP3IL-18HN核酸疫苗的构建及其对喉癌细胞杀伤作用的研究

• 作 者: 管国芳 金宁一 米志强 李霄 连海 金春顺 孙丽丽 文连姬
• 机 构: 吉林大学白求恩医学部第二临床医院耳鼻咽喉科,长春130041,军事医学科学院全军基因工程重点实验室,军事医学科学院全军基因工程重点实验室,军事医学科学院全军基因工程重点实验室,军事医学科学院全军基因工
• 发表日期: 2005年40期
• 关键词: 喉癌细胞 pVVP3IL-18HN 核酸疫苗 疫苗 DNA 喉肿瘤 DNA 重组 新城疫病毒 白介素18 重组质粒 有效杀伤

目的

通过构建共表达凋亡素基因、新城疫病毒HN基因和白介素18(interleukin-18,IL-18)基因的核酸疫苗,观察联合应用此三种基因对喉癌细胞的杀伤效应.

方法

在真核表达质粒pVAX1中的CMV启动子下游插入凋亡素基因和含有IL-18HN嵌合基因并携带IRES启动子的基因片段,构建能同时表达三种基因的真核表达质粒pVVP3IL-18HN,经RT-PCR、间接免疫荧光和Western-blot法检测外源基因的表达.采用脂质体介导法将构建的重组质粒pVVP3IL-18HN体外转染Hep-2细胞,运用MTT法检测不同质粒浓度、不同作用时间,该重组质粒对喉癌细胞Hep-2的杀伤率.

结果

pVVP3IL-18HN可有效杀伤喉癌细胞,且在作用72 h、质粒浓度为20 μg/ml时杀伤率最高,达61.9%.

结论

重组质粒pVVP3IL-18HN能有效杀伤Hep-2细胞,可用于喉癌的治疗和研究.