【摘 要】
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本研究采用RT-PCR技术扩增猪带绦虫六钩蚴TSOL16免疫原基因,将扩增产物与pMD18-T载体连接,重组质粒经PCR、酶切鉴定后进行测序;构建TSOL16基因的pGEX-4T-1原核表达载体,用IPT
【机 构】
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中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室/甘肃省动物寄生虫病重点实验室,甘肃,兰州,730046新疆农业大学,动物医学学院,新疆,乌鲁木齐,830052;中国农业科学院兰州兽医研
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本研究采用RT-PCR技术扩增猪带绦虫六钩蚴TSOL16免疫原基因,将扩增产物与pMD18-T载体连接,重组质粒经PCR、酶切鉴定后进行测序;构建TSOL16基因的pGEX-4T-1原核表达载体,用IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE、Western blot分析;将所表达的蛋白免疫小鼠,经ELISA检测血清抗体验证其免疫原性.结果显示:所克隆的TSOL16基因片段长度为559 bp,含有1个402 bp的开放阅读框架,编码134个氨基酸,与已报道的猪带绦虫六钩蚴TSOL16基因核苷酸序列同源性为99%;表达的融合蛋白大小为40 Ku,并能被猪带绦虫六钩蚴阳性血清所识别;免疫小鼠在1周后即检测到血清抗体,第30 d即达到较高水平,说明该融合蛋白具有较好的免疫原性.
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