益母草碱抑制人脑血管外膜成纤维细胞增殖并促进细胞凋亡的机制研究

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目的 探讨益母草碱对人脑血管外膜成纤维细胞(HBVAFs)增殖和凋亡的影响,并研究其作用机制.方法 采用不同浓度的益母草碱干预体外培养的HBVAFs,通过噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活力,并筛选后续实验加药浓度,采用10μmol/L的益母草碱处理HBVAFs,实验分为Control组(正常对照)、Leonurine组(10μmol/L益母草碱)和Leo+PMA组(10μmol/L益母草碱和1μmol/L NF-κB信号通路激活剂佛波酯PMA).克隆形成、流式细胞术和Annexin V-FITC/PI双染色实验分别检测各组细胞增殖、周期和凋亡情况,蛋白免疫印迹(Western blot)分析细胞中核转录因子-κB p65(NF-κB p65)、IκB激酶-α(IKK-α)和IκB激酶-β(IKK-β)表达水平.结果 随着益母草碱浓度的升高,HBVAFs增殖率随之降低,呈明显的浓度依赖性,益母草碱对HBVAFs的IC50为12.55μmol/L,因此后续实验选择10μmol/L为加药浓度.与Control组比较,Leonurine组克隆形成率明显降低(P<0.05),与Leonurine组比较,Leo+PMA组克隆形成率明显升高(P<0.05).与Control组比较,Leonurine组G2/M期细胞比例明显增多(P0.05);与Leonurine组比较,Leo+PMA组G2/M期细胞比例明显减少(P0.05).与Control组比较,Leonurine组细胞凋亡率明显升高(P<0.05),与Leonurine组比较,Leo+PMA组细胞凋亡率明显降低(P<0.05).与Control组比较,Leonurine组细胞中NF-κB p65、IKK-α和IKK-β蛋白表达明显下调(P<0.05),与Leonurine组比较,Leo+PMA组细胞中NF-κB p65、IKK-α和IKK-β蛋白表达明显上调(P<0.05).结论 益母草碱可能通过抑制NF-κB信号通路的激活实现对HBVAFs增殖抑制和凋亡诱导的作用.
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