转染胸苷磷酸化酶基因对5′-脱氧氟脲苷抗结肠癌细胞株活性的影响

• 作 者: 刘剑 张继民 高庆 王绮雯 叶钿均 刘影
• 机 构: 广州医科大学第二附属医院胃肠外科,广州医科大学第二附属医院胃肠外科,广州医科大学第二附属医院胃肠外科,广州医科大学第二附属医院胃肠外科,广州医科大学第二附属医院胃肠外科,广州医科大学第二附属医院胃肠外
• 发表日期: 2013年51期
• 关键词: 结肠肿瘤 胸苷磷酸化酶 氟尿嘧啶

目的

探讨人结肠癌细胞系SW480和LOVO细胞株转染胸苷磷酸化酶（TP）基因后转化5′-脱氧氟脲苷（5′-DFUR）为氟尿嘧啶（5-FU）能力的变化及5′-DFUR抗癌细胞株活性的变化。

方法

构建包含TP cDNA的真核表达载体，用慢病毒包装后转染结肠癌细胞株SW480和LOVO。转染5代后以免疫荧光法和流式细胞技术检测转染效率；RT-PCR和Western blot法分别检测2株细胞的TP mRNA和TP蛋白表达。然后以高效液相色谱法（HPLC）检测2株细胞转染前后转化5′-DFUR为5-FU的量；MTT法检测5′-DFUR对2株细胞转染前后半数抑制浓度（IC₅₀）。

结果

转染TP基因后SW480-TP与LOVO-TP 5代细胞转染效率稳定在95%左右。2株转染细胞的TP mRNA表达分别比野生型细胞增加（695±172）倍（t=－7.00，P=0.002）和（282±87）倍（t=－5.61，P=0.030），Western blot显示TP蛋白表达也明显增强。转染后的SW480-TP与LOVO-TP在培养基中分别使5′-DFUR转化为5-FU的量增加（t=19.406～66.921，P<0.01）。5′-DFUR对SW480的IC₅₀由（1641±53）μmol/L降至（587±17）μmol/L（t=－32.59，P<0.01）；对LOVO的IC₅₀由（1607±57）μmol/L降至（1088±89）μmol/L（t=－8.52，P<0.01）。

结论

慢病毒载体能够高效地将TP cDNA转染至人结肠癌细胞SW480和LOVO并稳定传代，转染后2株细胞的TP mRNA和TP蛋白表达明显增高，使5′-DFUR转化为5-FU的量增加，对结肠癌细胞株SW480和LOVO的抑制作用增强。