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摘 要：该实验研究耐力运动及衰老对小鼠肾脏Bcl-2、Bax基因表达的影响。对照组小鼠常规笼内饲养，衰老组小鼠每日注射D-半乳糖，运动组小鼠在动物跑台进行为期5周的训练。所有实验小鼠在末次训练结束后24h取材，检测各组小鼠肾脏Bcl-2、Bax表达。结果显示衰老组小鼠Bcl-2基因表达减弱，而运动组与对照组相比无显著差异，Bax表达各组间无显著差异，从而说明Bcl-2水平的降低可能在衰老发生过程中发挥重要作用，耐力运动可通过调控Bcl-2水平延缓衰老进程。
关键词：耐力运动 肾脏 Bcl-2 Bax
中图分类号：G80-32 文献标识码：A 文章编号：2095-2813（2017）03（b）-0016-02
细胞凋亡现象是科学家Kerr在1965年发现的，并在几年后确定细胞凋亡一词，它被看成一种自主性行为，而运动与细胞凋亡的研究更是深入到了分子水平以至于基因方面，其中Bcl-2基因，Bax基因作为一对功能基因处于核心地位[5]。细胞凋亡的诱导因子很多，该次实验凋亡的诱导因子为D-半乳糖试剂[1，2]，通过检测Bcl-2基因和Bax基因在衰老小鼠肾脏中的表达水平，探讨耐力运动对小鼠是否具有抗衰老的作用，为以后此方面的研究提供一些参考。
1 材料与方法
1.1 动物与分组
从徐州医学院动物饲养中心采购了30只健康的昆明种系小鼠，进行3天适应性喂养后，随机抽取10只组成一组，分别标记为 对照组、衰老组、衰老运动组。饲养的过程中，不限制进食和饮水。
1.2 运动方案
作为安静对照组的老鼠在笼内正常生活，不运动。衰老组和衰老运动组的老鼠每日被注射剂量为0.025 mL/g的D-半乳糖，衰老运动组进行为期5周的小动物跑台运动，初始速度为7 m/min，后每日每分钟递增2 m，直至最后速度达到15 m/min。每周运动6天，每次持续60 min，休息的那天，仍注射D-半乳糖。
1.3 免疫组织化学技术检测
采用常规的脊柱横断的处死方法，快速取出组织进行组织包埋，再遵循Bcl-2，Bax试剂盒的操作说明进行DAB显色，完成后用自来水充分冲洗，苏木素复染，最后封片。染色后会发现Bcl-2和Bax蛋白的表达产物呈棕色或棕褐色颗粒，位于细胞质中，而在细胞核和细胞膜中很少见到，其中被苏木素复染的细胞核呈蓝色。在光学显微镜（×400）的视野中随机性抽取5个视野来统计Bax阳性细胞数及Bcl-2阳性细胞数，用平均值表示。武汉博士德生物工程有限公司提供了该次实验的检测试剂盒。
2 数据处理及结果分析
从实验结果来看，3组小鼠肾脏组织中均可见呈棕黄色的两种蛋白的表达，分布部位胞质较多见，偶见于胞膜或胞核。衰老组小鼠Bcl的蛋白表达显著低于安静对照组，衰老运动组小鼠显著高于衰老组，与对照组无显著差异。衰老组bax的蛋白表达高于对照组，衰老运动组低于衰老组，但各组间差异均不显著（P <0.05）。衰老组Bax/Bcl-2水平与对照组相比显著下降，同时显著高于衰老运动组。
3 讨论
运动对生物体细胞凋亡的影响，会因运动强度的不同而不同，如有研究表明，低强度耐力训练使小鼠肾脏Bcl-2蛋白表达改变，最终减弱了细胞凋亡过程；而大强度耐力训练使细胞凋亡增多是与Bax蛋白表达有关[5]。一些关于肾脏的亚显微结构，氧自由基损伤以及细胞凋亡和基因表达的研究性期刊表明，中等强度的有氧耐力运动运动中与运动后自由基的产生被减弱，提高了抗氧化的能力，使得体内的氧化与抗氧化系统更加平衡，因此，延缓衰老和抑制细胞凋亡的有效手段包括有氧运动[6-8]。长期的有氧运动过后，Bcl-2mRNA表达被减弱，Bax基因mRNA的表达率增高，Bcl-2抵抗凋亡的能力受到抑制，Bax促进凋亡的活性反被提高；而进行抗阻训练对Bcl-2和Bax基因mRNA的表达作用的影响与上相反，使抵抗凋亡的作用增大[9，10]。该实验的结果显示，衰老组小鼠Bcl的蛋白表达显著低于安静对照组，衰老运动组小鼠显著高于衰老组，从而反映出衰老过程中伴随Bcl蛋白表达的改变，Bcl可能通过调控细胞凋亡影响衰老的进程。耐力运动显著改变衰老发生过程中Bcl蛋白表达及Bax/Bcl-2的变化，这可能也是有氧运动延缓衰老的机制之一。
参考文献
[1] Borzilli GV，Endo K，T sujimoto Y，et al.bc-l2 co nfer sgrowth and survival advantage age to inter leukin7-dependenterlypre-B cells which become factor independentby multi step process in culture[J].Oncog ene，1992（7）：869-875.
[2] 石娟，魏敏杰.D-半乳糖與衰老研究的进展及临床意义[J].中国老年学杂志，2009，15（29）：2001-2003.
[3] 马春莲，张立.不同强度运动对大鼠肾脏Bcl-2蛋白表达及细胞凋亡的影响[J].宜宾学院学报，2012，12（12）：92-95.
[4] 邹秋英，刘祥梅，吴宇强，等.不同强度耐力训练后力竭运动大鼠肾细胞凋亡及影响机制的研究[J].沈阳体育学院学报，2008，27（5）：55-58.
[5] 武玉元，张军，常波.运动对衰老的影响[J].沈阳体育学院学报，2006，25（3）：68-71.
[6] 李军勇，伊力哈木·托合提.运动对细胞凋亡的影响[J].现代生物医学进展，2011，11（3）：593-599.
[7] 刘祥梅，吴宇强，严秋，等.耐力训练对力竭运动诱导的大鼠肾实质细胞凋亡的影响[J].中国运动医学杂志，2008，27（4）：488-491.
[8] 林喜秀，瞿树林，陈嘉勤.低氧训练对大鼠肾组织细胞凋亡及HIF-1α、bax、bcl-2表达的影响[J].中国运动医学杂志，2008，27（5）：571-574.
[9] 李惠翔，赵红军，李晓莉.不同运动强度训练对大鼠骨骼肌细胞Bcl-2、FAS表达的影响[J].中外医疗，2008（33）：12-13.
[10] 田振军，孟辕丽.不同强度运动对大鼠肾脏皮质区NOS、Bcl-2/Bax表达的影响[J].陕西师范大学学报：自然科学版，2006，34（2）：105-109.
关键词：耐力运动 肾脏 Bcl-2 Bax
中图分类号：G80-32 文献标识码：A 文章编号：2095-2813（2017）03（b）-0016-02
细胞凋亡现象是科学家Kerr在1965年发现的，并在几年后确定细胞凋亡一词，它被看成一种自主性行为，而运动与细胞凋亡的研究更是深入到了分子水平以至于基因方面，其中Bcl-2基因，Bax基因作为一对功能基因处于核心地位[5]。细胞凋亡的诱导因子很多，该次实验凋亡的诱导因子为D-半乳糖试剂[1，2]，通过检测Bcl-2基因和Bax基因在衰老小鼠肾脏中的表达水平，探讨耐力运动对小鼠是否具有抗衰老的作用，为以后此方面的研究提供一些参考。
1 材料与方法
1.1 动物与分组
从徐州医学院动物饲养中心采购了30只健康的昆明种系小鼠，进行3天适应性喂养后，随机抽取10只组成一组，分别标记为 对照组、衰老组、衰老运动组。饲养的过程中，不限制进食和饮水。
1.2 运动方案
作为安静对照组的老鼠在笼内正常生活，不运动。衰老组和衰老运动组的老鼠每日被注射剂量为0.025 mL/g的D-半乳糖，衰老运动组进行为期5周的小动物跑台运动，初始速度为7 m/min，后每日每分钟递增2 m，直至最后速度达到15 m/min。每周运动6天，每次持续60 min，休息的那天，仍注射D-半乳糖。
1.3 免疫组织化学技术检测
采用常规的脊柱横断的处死方法，快速取出组织进行组织包埋，再遵循Bcl-2，Bax试剂盒的操作说明进行DAB显色，完成后用自来水充分冲洗，苏木素复染，最后封片。染色后会发现Bcl-2和Bax蛋白的表达产物呈棕色或棕褐色颗粒，位于细胞质中，而在细胞核和细胞膜中很少见到，其中被苏木素复染的细胞核呈蓝色。在光学显微镜（×400）的视野中随机性抽取5个视野来统计Bax阳性细胞数及Bcl-2阳性细胞数，用平均值表示。武汉博士德生物工程有限公司提供了该次实验的检测试剂盒。
2 数据处理及结果分析
从实验结果来看，3组小鼠肾脏组织中均可见呈棕黄色的两种蛋白的表达，分布部位胞质较多见，偶见于胞膜或胞核。衰老组小鼠Bcl的蛋白表达显著低于安静对照组，衰老运动组小鼠显著高于衰老组，与对照组无显著差异。衰老组bax的蛋白表达高于对照组，衰老运动组低于衰老组，但各组间差异均不显著（P <0.05）。衰老组Bax/Bcl-2水平与对照组相比显著下降，同时显著高于衰老运动组。
3 讨论
运动对生物体细胞凋亡的影响，会因运动强度的不同而不同，如有研究表明，低强度耐力训练使小鼠肾脏Bcl-2蛋白表达改变，最终减弱了细胞凋亡过程；而大强度耐力训练使细胞凋亡增多是与Bax蛋白表达有关[5]。一些关于肾脏的亚显微结构，氧自由基损伤以及细胞凋亡和基因表达的研究性期刊表明，中等强度的有氧耐力运动运动中与运动后自由基的产生被减弱，提高了抗氧化的能力，使得体内的氧化与抗氧化系统更加平衡，因此，延缓衰老和抑制细胞凋亡的有效手段包括有氧运动[6-8]。长期的有氧运动过后，Bcl-2mRNA表达被减弱，Bax基因mRNA的表达率增高，Bcl-2抵抗凋亡的能力受到抑制，Bax促进凋亡的活性反被提高；而进行抗阻训练对Bcl-2和Bax基因mRNA的表达作用的影响与上相反，使抵抗凋亡的作用增大[9，10]。该实验的结果显示，衰老组小鼠Bcl的蛋白表达显著低于安静对照组，衰老运动组小鼠显著高于衰老组，从而反映出衰老过程中伴随Bcl蛋白表达的改变，Bcl可能通过调控细胞凋亡影响衰老的进程。耐力运动显著改变衰老发生过程中Bcl蛋白表达及Bax/Bcl-2的变化，这可能也是有氧运动延缓衰老的机制之一。
参考文献
[1] Borzilli GV，Endo K，T sujimoto Y，et al.bc-l2 co nfer sgrowth and survival advantage age to inter leukin7-dependenterlypre-B cells which become factor independentby multi step process in culture[J].Oncog ene，1992（7）：869-875.
[2] 石娟，魏敏杰.D-半乳糖與衰老研究的进展及临床意义[J].中国老年学杂志，2009，15（29）：2001-2003.
[3] 马春莲，张立.不同强度运动对大鼠肾脏Bcl-2蛋白表达及细胞凋亡的影响[J].宜宾学院学报，2012，12（12）：92-95.
[4] 邹秋英，刘祥梅，吴宇强，等.不同强度耐力训练后力竭运动大鼠肾细胞凋亡及影响机制的研究[J].沈阳体育学院学报，2008，27（5）：55-58.
[5] 武玉元，张军，常波.运动对衰老的影响[J].沈阳体育学院学报，2006，25（3）：68-71.
[6] 李军勇，伊力哈木·托合提.运动对细胞凋亡的影响[J].现代生物医学进展，2011，11（3）：593-599.
[7] 刘祥梅，吴宇强，严秋，等.耐力训练对力竭运动诱导的大鼠肾实质细胞凋亡的影响[J].中国运动医学杂志，2008，27（4）：488-491.
[8] 林喜秀，瞿树林，陈嘉勤.低氧训练对大鼠肾组织细胞凋亡及HIF-1α、bax、bcl-2表达的影响[J].中国运动医学杂志，2008，27（5）：571-574.
[9] 李惠翔，赵红军，李晓莉.不同运动强度训练对大鼠骨骼肌细胞Bcl-2、FAS表达的影响[J].中外医疗，2008（33）：12-13.
[10] 田振军，孟辕丽.不同强度运动对大鼠肾脏皮质区NOS、Bcl-2/Bax表达的影响[J].陕西师范大学学报：自然科学版，2006，34（2）：105-109.