【摘 要】
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猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)是猪伪狂犬病的病原.目前,针对该病毒有较多成熟的商品化疫苗,但病毒变异频繁,因而在生猪养殖中伪狂犬病的发生仍然较为普遍.如何清除宿主体内野毒是防控该病的关键所在.应用腺联病毒携载CRISPR/Cas9系统,以小鼠为动物模型,针对PRV的TK基因、gE基因和VP16基因进行剪切,减弱PRV毒力和复制能力,以期清除小鼠体内的PRV.结果表明,成功构建带有CRISPR/Cas9表达系统及相应sgRNA的pX601重组质粒(pXTK、pXGE、pXVP
【机 构】
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福建省农业科学院畜牧兽医研究所,福州350013;福建师范大学南方生物医学研究中心,福州350015;福建师范大学南方生物医学研究中心,福州350015
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猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)是猪伪狂犬病的病原.目前,针对该病毒有较多成熟的商品化疫苗,但病毒变异频繁,因而在生猪养殖中伪狂犬病的发生仍然较为普遍.如何清除宿主体内野毒是防控该病的关键所在.应用腺联病毒携载CRISPR/Cas9系统,以小鼠为动物模型,针对PRV的TK基因、gE基因和VP16基因进行剪切,减弱PRV毒力和复制能力,以期清除小鼠体内的PRV.结果表明,成功构建带有CRISPR/Cas9表达系统及相应sgRNA的pX601重组质粒(pXTK、pXGE、pXVP16);并包装成具有基因编辑功能的AAV-gE、AAV-VP16和AAV-TK病毒;经细胞水平和小鼠的感染试验,证实该方法能明显降低细胞和小鼠体内的PRV载量,并且延长小鼠存活时间,提高小鼠成活率,该治疗结果与治疗次数呈正相关.该小鼠模型的研究结果为猪伪狂犬病的临床治疗提供了新的借鉴.
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Oct4基因和Cdx2基因是附植前胚胎发育的重要调控基因,并最终调控了胎儿和胎盘的发育,也在胚胎妊娠识别和附植时调控了干扰素(interferon tau,IFNT)的表达.本研究通过体外成熟、体外受精和体外培养获得了不同发育时期的绵羊胚胎,应用免疫荧光染色探讨了Oct4在早期胚胎的表达规律,结果表明:受精卵和早期卵裂胚中未检测到Oct4蛋白;16～32细胞期桑葚胚部分细胞表达Oct4蛋白;Oct4与Cdx2基因在绵羊囊胚滋养层细胞中存在共表达.
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