生存素反义脱氧寡核苷酸治疗喉癌的体内外实验

• 作 者: 项丞 刘伟松 贾深汕
• 机 构: 150040 哈尔滨医科大学附属肿瘤医院头颈外科,150040 哈尔滨医科大学附属肿瘤医院头颈外科,150040 哈尔滨医科大学附属肿瘤医院头颈外科
• 出 处: 中华耳鼻咽喉头颈外科杂志
• 发表日期: 2006年41期
• 关键词: 生存素 ASODN 寡核苷酸 喉肿瘤 寡核苷酸 反义 喉癌 基因疗法 动物 实验 人喉癌细胞 喉癌细胞

目的

观察生存素反义脱氧寡核苷酸（antisense oligodeoxynuclecotide, ASODN）诱导人喉癌细胞系Hep2凋亡的作用及对喉癌动物模型抑瘤率的影响，以探讨反义技术选择性封闭目的基因表达进而实现抗肿瘤的作用，为喉癌的基因治疗提供新思路。

方法

用脂质体Lipofectamine ™2000将反义寡核苷酸生存素片段导入人喉癌细胞系Hep2，通过测定细胞增殖的四甲基偶氮唑蓝［3-（4,5-dimethylthiazol-2-yl）-2,5-diphenyltetrazolium bromide,TMM］法检测转染后72 h内的细胞生长情况；转染48 h后逆转录聚合酶链反应（reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR）检测生存素基因表达，Western Blot检测蛋白表达；同时细胞凋亡原位检测（terminal deoxynucleotide mediated nick end labeling, TUNEL）法和流式细胞仪检测细胞凋亡情况。Hep2细胞接种于32只裸鼠，分组给予Lipo-ASODN进行治疗，2周后评价其抑瘤率。

结果

MTT实验显示Lipo-ASODN组浓度为1.0 μmol/L和2.0 μmol/L时细胞生长曲线逐渐降低，72 h细胞抑制率可达52.5%和71.4%，两组间差异具有统计学意义（P=0.046），均显著高于对照组（P值分别为0.003和0.0004）；转染48 h后Lipo-ASODN组RT-PCR结果均可见生存素基因表达量明显少于对照组，Western Blot见生存素蛋白表达呈下降趋势；Lipo-ASODN组TUNEL检测可见细胞核内出现凋亡特征性阳性染色，流式细胞仪检测可见明显凋亡峰，而对照组无此现象。动物实验Lipo-ASODN组肿瘤抑制率可达48.1%和61.3%，显著高于对照组（P值分别为0.004和0.0006），且两组间差异具有统计学意义（P=0.032），呈一定的剂量依赖性。

结论

生存素反义寡核苷酸具有诱导喉癌细胞凋亡和体内抗肿瘤的作用，提示反义核酸技术可作为一种治疗手段应用于喉癌的基因治疗。