【摘 要】
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背景 衰老状态的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨分化能力降低,影响正常骨代谢.细胞自噬在衰老过程及成骨代谢中发挥重要作用,大麻二酚(cannabidiol,CBD)能促进自噬,但CBD能否通过调节自噬进而促进衰老BMSCs成骨分化仍不清楚.目的 探究CBD对衰老小鼠BMSCs成骨分化的影响以及细胞自噬在其中的作用.方法 复苏并培养小鼠BMSCs,使用D-半乳糖(D-gal)诱导体外细胞衰老模型,将细胞随机分为对照组(Vehicle)、
【机 构】
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解放军医学院,北京 100853;首都医科大学附属复兴医院 口腔科,北京 100038;解放军总医院第一医学中心 口腔科,北京 100853;中国人民解放军战略支援部队特色医学中心 口腔科,北京100
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背景 衰老状态的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨分化能力降低,影响正常骨代谢.细胞自噬在衰老过程及成骨代谢中发挥重要作用,大麻二酚(cannabidiol,CBD)能促进自噬,但CBD能否通过调节自噬进而促进衰老BMSCs成骨分化仍不清楚.目的 探究CBD对衰老小鼠BMSCs成骨分化的影响以及细胞自噬在其中的作用.方法 复苏并培养小鼠BMSCs,使用D-半乳糖(D-gal)诱导体外细胞衰老模型,将细胞随机分为对照组(Vehicle)、衰老模型组(D-gal)和CBD干预组(D-gal+CBD).qRT-PCR检测衰老相关基因P16和P21的表达,CCK-8法测定不同条件下BMSCs的增殖活性.加入BMSCs自噬抑制组(D-gal+CBD+氯喹),对四组细胞进行成骨诱导后,Western blot检测自噬相关蛋白P62及LC3B的表达情况,qRT-PCR评估成骨相关基因的表达改变,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)检测试剂盒测定ALP活性.结果 经D-gal处理后的BMSCs高表达衰老基因P16及P21,细胞增殖能力降低,P62蛋白表达升高,LC3B-Ⅱ蛋白表达降低,ALP、Runt相关转录因子2和骨钙素的mRNA表达水平及ALP活性下降(P<0.05);而CBD干预显著下调衰老BMSCs中P16及P21的表达,增强细胞增殖活性(P<0.05).同时,CBD降低P62水平,显著提升LC3B-Ⅱ水平,促进成骨相关基因的转录表达并提高ALP活性(P<0.05).而当使用氯喹抑制细胞自噬后,CBD促进衰老BMSCs成骨分化的作用减弱(P<0.05).结论 CBD通过激活自噬促进衰老小鼠BMSCs成骨分化.
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