【摘 要】
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合成含靶向生长抑素(Somatostatin,SS)前体基因的siRNA转录模板的发夹结构,插入pSilencer TM2.1-U6载体构建重组质粒2.1-S.提取小鼠下丘脑组织总RNA,PCR扩增获得SS前体基因eD
【机 构】
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吉林大学,华南农业大学动物科学学院,河北农业大学海洋学院
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合成含靶向生长抑素(Somatostatin,SS)前体基因的siRNA转录模板的发夹结构,插入pSilencer TM2.1-U6载体构建重组质粒2.1-S.提取小鼠下丘脑组织总RNA,PCR扩增获得SS前体基因eDNA,构建真核表达载体pcDNA3.1-SS、pEGFP-SS.将2.1-S分别与pcDNA3.1-SS、pEGFP-SS共转染入细胞中瞬时表达,检测SS前体基因表达变化.结果显示.重组质粒在E.coli(DH5a)内扩增,酶切及测序鉴定证明siRNA转录模板完整,正确地插入到pSilencerTM2.1-U6质粒中,重组质粒pcDNA3.1-SS与pEGFP-SS经测序序列完全正确.转染细胞在mRNA水平及蛋白水平均检测到2.1-S对SS前体基因表达的抑制.这表明,SS基因靶向siRNA稳定表达栽体能在哺乳动物细胞中表达,并对靶基因呈抑制作用.
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