【摘 要】
：
目的 获得人Smith D1(Sm D1)抗原基因,并进行原核表达及建立斑点免疫金渗虑(dot immunogold filtration assay,DIGFA)检测方法.方法 采用基因工程技术,通过PCR从人白血病HL-6
【机 构】
：
南京军区福州总医院全军检验医学研究所
论文部分内容阅读
目的 获得人Smith D1(Sm D1)抗原基因,并进行原核表达及建立斑点免疫金渗虑(dot immunogold filtration assay,DIGFA)检测方法.方法 采用基因工程技术,通过PCR从人白血病HL-60细胞cDNA文库中扩增人Sm Dl抗原基因,构建pGEX-5T-Sm D1重组表达载体,在大肠杆菌BL21中通过异丙基硫代半乳糖苷酶(IPTG)诱导表达Sm D1蛋白.利用初步纯化的Sm D1抗原建立DIGFA.结果 重组质粒测序和酶切结果显示Sm D1抗原基因正确插入pGEX-5T,重组蛋白、复性及纯化产物经12%十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),在相对分子质量为39 000处有一明显的蛋白表达条带,免疫印迹法分析表明,重组蛋白具有人Sm D1抗原的抗原性.DIGFA与色疫印迹法检测结果的差异无统计学意义(P＞0.05),二者的符合率为91.7%.DIGFA敏感度为100%,特异度为83.3%结论通过基因工程技术制备获得初步纯化的谷胱苷肽转移酶(GST)-Sm D1融合蛋白,用该抗原建立的DIGFA与免疫印迹法相似,且具有快速、简便和可靠等优点.
其他文献
目的探讨中西医结合综合治疗方案对急性脑出血患者日常生活能力(ADL)及生存质量(QOL)的影响。方法采用多中心、单盲随机对照试验的设计方法,404例患者分别用中西医结合综合(
目的观察大鼠模拟失重后中脑导水管周围灰质(periaqueductafgray,PAG)神经元Fos蛋白表达的改变。方法采用雌性大鼠尾部悬吊法建立模拟失重模型,按体重配对原则随机将大鼠分为
目的:评价美罗培南和亚胺培南治疗急性白细胞减少期并发肺部感染的成本-效果。方法:采用回顾性方法,对67例分别采用美罗培南和亚胺培南治疗急性白细胞减少期并发肺部感染的效
目的:探讨硒化麒麟菜多糖在体外对宫颈癌Hela细胞株生长和凋亡的作用及机制.方法: 以宫颈癌Hela细胞株为研究对象,用MTT法检测硒化麒麟菜多糖对肿瘤细胞增殖的影响,流式细胞
在近年发展的疫苗策略中,DNA疫苗由于具备独特的优势而成为研究的热点.然而,虽然DNA疫苗的效果已经在多种动物模型中得到了证实,但是在人体临床试验的结果却不尽如人意.近年
利用大鼠模型研究糖尿病对尿道功能的损害,以及病程长短对其的影响.雌性SD大鼠(250～275 g),链脲霉素(STZ)65mg/kg腹腔注射得到糖尿病大鼠模型,5周或10周后在乌拉坦麻醉下利用
目的 研究我国献血者血液HIV及HCV残余风险;评估我国开展血液核酸检测(NAT)的可行性和必要性.方法 采集乌鲁木齐、昆明、北京、广州、杭州5城市献血者血样,用Chiron Procleix
目的 探索肠上皮内淋巴细胞(IEL)受照射后IFN-γ分泌的变化及其对肠上皮细胞增殖的影响.方法 采用ELISPOT法观察IEL受60Coγ射线8 Gy照射前后IFN-γ的分泌变化;利用新分离的I
目的 探讨PF膨胀式髓内钉治疗股骨转子间骨折的疗效及注意事项.方法 2004年3月至2006年1月,收治95例新鲜股骨转子间骨折患者,其中采用PF膨胀式(自锁式)髓内钉治疗并有完整随
目的探讨肺特异性 X 蛋白基因检测对肺癌骨髓微转移的诊断价值。方法用荧光定量逆转录(RT)-PCR 法检测51例肺癌、13例肺外肿瘤(乳腺癌4例、胃癌6例、肝癌3例)、22例良性疾病(