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[摘要]目的：探讨分析采取MMP-9抑制剂作用于口腔鳞癌细胞后对其增殖与侵袭能力的研究。方法：提取口腔鳞癌细胞标本进行培养，不同浓度的MMP-9抑制剂作用对细胞进行RT-PCR检测、划痕实验检测增殖与侵袭能力的研究。结果：在OumolL浓度时增殖数据为1.0，在5umol/L时鳞的增殖数据为0.5，说明MMP-9抑制剂能够明显抑制细胞增殖。随着MMP-9抑制剂不断增加与细胞处理的时间不断延长，细胞迁移距离逐渐缩小，并呈现相关性。结论：对口腔鳞状细胞而評取MMP-9抑制剂进行干预后可明显降低细胞增殖以及侵袭能力，为临床研究提供重要理论依据。
[关键词]：MMP-9抑制剂;口腔鳞癌细胞;增殖;侵袭
[中图分类号]R73 [文献标识码]A [文章编号]2107-2306（2020）04-115-01
口腔癌为头颈外科中最常见的恶性肿瘤之一，在我国的发病率逐年攀升。其发病原因多种多样，大部分由口腔黏膜表层鳞状细胞发生恶变而来。目前临床上对于口腔癌患者通常采取手术干预以及放化疗干预方式进行治疗[1]，对于患者口腔原有结构的破坏较大，而在其他瘤种领域较为有效的靶向治疗目前在口腔癌方面大多还停留在基础和临床试验中。口腔癌中肿瘤细胞脱离原发灶向远处侵袭转移与其不良预后有密切关系，而其中基质金属蛋白酶（Matrixmetalloproteinase，MMPs）作为降解细胞外基质的主要酶类，MMP-9的过度表达与口腔癌的浸润和淋巴结转移密切相关，在口腔癌发生发展过程中发挥关键作用[2]。因此本研究探讨MMP-9抑制剂对于口腔癌细胞的增殖与侵袭能力是否能够有效抑制，为临床治疗提供参考。
资料和方法
1.1鳞状细胞的采集以及培养：选取我院口腔癌患者口腔上皮细胞中的鳞状细胞株，在37C标准温度下，放置于10%胎牛血清中进行增殖培养，并在培养皿中加人100U/ml单位剂量的青霉素进行保护，将配置好的培养皿放置在CO2孵化箱内进行细胞增殖，并保持孵化箱内CO2浓度水平保持在5%，并根据实验所需对处于生长期内的细胞进行相应实验操作。
1.2实验方法干预：对口腔鳞状细胞进行RT-PCR反应检测，采取5umol/L的MMP-9抑制剂对培养皿中的对数期鳞状细胞进行持续处理48h，将TRNzol加入培养皿中，按照相应提取细胞RNA的标准步骤进行相应细胞RNA的提取操作，并最后将所提取的RNA进行紫外分光光度计进行RNA浓度与纯度进行相应测定工作，并采取SYBR荧光染色剂将对数期鳞状细胞的mRNA进行相应分析表达处理。在采取迁移实验中，首先操作人员选取马克笔在检测6孔板的背面均勾画出相等长度的横线，每条横线间隔在lcm左右，并保证每条横线横穿过检测板上的孔隙，将处于对数期的鳞状细胞注入孔隙内并保持12h培养时间，每组实验细胞设定3个复孔，在培养12h后采用规格为200ul的移液枪，将枪头垂直在6孔板的板底并进行划痕处理，并按照浓度不同分别加人到各个MMP-9抑制剂中，并选取阴性标准作为对照组。操作完毕后将其放人37C标准温度下CO2浓度水平保持在5%下继续进行细胞培养，每个孔隙选取5个不同的区域并按照时间0时、24时、48时对其进行拍照处理，采取专业分析移动轨迹的软件对划痕图像进行综合数据分析，根据测量图像中划痕的宽度数据来计算鳞状细胞的迁移率。
1.3研究方法：数据用SPSS20.0统计分析，计量资料采取正太分布的标准进行计算，实验计量资料数据均采取均数、标准差进行标识。P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1鳞状细胞RT-PCR检测结果数据：在MMP-9抑制剂0umol/L浓度时鳞状细胞的增殖数据为1.0，在MMP-9抑制剂浓度为5umol/L时鳞状细胞的增殖数据为0.5，说明MMP-9抑制剂能够明显抑制鳞状细胞的增殖功能，统计学差异明显（P<0.05）。
2.2鳞状细胞的划痕实验数据：在增殖24hMMP-9抑制剂5umol/L浓度时鳞状细胞的迁移率为16.48%、10umol/L浓度時迁移率为12.45%，对照组迁移率为32.81%。在48hMMP-9抑制剂浓度为10umol/L时鳞状细胞的迁移率为19.88%、10umol/L浓度时迁移率为13.68%，对照组迁移率为42.22%。统计学差异明显（P<0.05）。
3讨论
口腔鳞癌颈淋巴结转移是影响患者预后的重要因素[3]。肿瘤的转移是一个包含多个阶段的复杂进程，其中肿瘤细胞对基底膜的破坏从而允许其在组织之间移动是一个重要的因素，而基质金属蛋白酶对细胞外基质的调节和重塑起着关键的作用[4]。既往研究中，通过对MMP-9的抑制可以有效降低乳腺癌、食道癌、喉头癌等肿瘤细胞的增殖[5-8]。本实验中在设定MMP9抑制剂Oumol/L浓度时鳞状细胞的增殖数据为1.0，在MMP-9抑制剂浓度为5umol/L时鳞状细胞的增殖数据为0.5，说明MMP-9抑制剂能够明显抑制鳞状细胞的增殖功能。，且随着MMP-9抑制剂不断增加与细胞处理的时间不断延长，细胞迁移距离逐渐缩小并呈现相关性。
说明MMP-9抑制剂可以明显抑制增殖的肿瘤细胞摆脱基底膜的束缚、干预肿瘤细胞的增殖与侵袭能力，从而达到控制患者口腔肿瘤细胞增殖与侵袭的能力。
综上所述，口腔鳞状细胞经MMP-9抑制剂进行干预后可明显降低细胞增殖能力和侵袭能力，为临床研究提供重要理论依据。
参考文献
[1].张桂莲，宿颖，张辛燕.山竹醇对人口腔鳞癌细胞糖酵解代谢通路的影响.北京口腔医学，2017，25（2）：6670-6670.
[2].李文荟，郭莉，谭耀文，etal.口腔癌及癌前病变组织中MMP-9基因表达的意义[J].临床口腔医学杂志，2007，23（1）：27-28. [3].李曉明，邸斌，尚耀东，etal.ClinicopathologicFeaturesandPrognosticFactorsofCervicalLymphNodeMetastasisinOralSquamousCellCarcinoma%口腔鳞癌颈淋巴结转移的临床病理学特点及其对预后的影响[D].癌症，2005，24（2）：208-212.
[4].Jacob A.The regulation of MMP targeting to invadopodia during cancer metastasis[J.Frontiers in cell and developmental biology，2015， 3：4.DOI：10.3389/fcell.2015.00004
[5].Hallett MA， Teng B， HasegawaH ，et al.Anti-matrixmetalloproteinase9 DNAzymedecreasestumorgrowthintheMMTVPyMT mousemodelelof breast cancer.Breast Cancer R esearchBcr， 2013， 15（1）：R12-R12.
[6].Ren F，Tang R，Zhang X，et al.Overexpression of MMP Family Members Functions as Prognostic Biomarker for Breast Cancer Patients：A Systematic Reviewand Meta-Analysis[J]. PloS one， 2015， 10（8）：e0135544.DOI：10.1371l/journal.pone.0135544
[7]. Palumbo A，Meireles Da Costa N，Pontes B，et al.Esophageal Cancer Development： Crucial Clues Arising from the Extracellular Matrix[J].Cells，2020，9（2）：.DOI： 10.3390/cells9020455
[8].Grzelczyk WL，Szemraj J.The matrix metalloproteinase in larynxcancer[J].Postepy higieny i medycynydos’ wiadczalnej （Online）， 2016，70（0）：1190-1197.
[关键词]：MMP-9抑制剂;口腔鳞癌细胞;增殖;侵袭
[中图分类号]R73 [文献标识码]A [文章编号]2107-2306（2020）04-115-01
口腔癌为头颈外科中最常见的恶性肿瘤之一，在我国的发病率逐年攀升。其发病原因多种多样，大部分由口腔黏膜表层鳞状细胞发生恶变而来。目前临床上对于口腔癌患者通常采取手术干预以及放化疗干预方式进行治疗[1]，对于患者口腔原有结构的破坏较大，而在其他瘤种领域较为有效的靶向治疗目前在口腔癌方面大多还停留在基础和临床试验中。口腔癌中肿瘤细胞脱离原发灶向远处侵袭转移与其不良预后有密切关系，而其中基质金属蛋白酶（Matrixmetalloproteinase，MMPs）作为降解细胞外基质的主要酶类，MMP-9的过度表达与口腔癌的浸润和淋巴结转移密切相关，在口腔癌发生发展过程中发挥关键作用[2]。因此本研究探讨MMP-9抑制剂对于口腔癌细胞的增殖与侵袭能力是否能够有效抑制，为临床治疗提供参考。
资料和方法
1.1鳞状细胞的采集以及培养：选取我院口腔癌患者口腔上皮细胞中的鳞状细胞株，在37C标准温度下，放置于10%胎牛血清中进行增殖培养，并在培养皿中加人100U/ml单位剂量的青霉素进行保护，将配置好的培养皿放置在CO2孵化箱内进行细胞增殖，并保持孵化箱内CO2浓度水平保持在5%，并根据实验所需对处于生长期内的细胞进行相应实验操作。
1.2实验方法干预：对口腔鳞状细胞进行RT-PCR反应检测，采取5umol/L的MMP-9抑制剂对培养皿中的对数期鳞状细胞进行持续处理48h，将TRNzol加入培养皿中，按照相应提取细胞RNA的标准步骤进行相应细胞RNA的提取操作，并最后将所提取的RNA进行紫外分光光度计进行RNA浓度与纯度进行相应测定工作，并采取SYBR荧光染色剂将对数期鳞状细胞的mRNA进行相应分析表达处理。在采取迁移实验中，首先操作人员选取马克笔在检测6孔板的背面均勾画出相等长度的横线，每条横线间隔在lcm左右，并保证每条横线横穿过检测板上的孔隙，将处于对数期的鳞状细胞注入孔隙内并保持12h培养时间，每组实验细胞设定3个复孔，在培养12h后采用规格为200ul的移液枪，将枪头垂直在6孔板的板底并进行划痕处理，并按照浓度不同分别加人到各个MMP-9抑制剂中，并选取阴性标准作为对照组。操作完毕后将其放人37C标准温度下CO2浓度水平保持在5%下继续进行细胞培养，每个孔隙选取5个不同的区域并按照时间0时、24时、48时对其进行拍照处理，采取专业分析移动轨迹的软件对划痕图像进行综合数据分析，根据测量图像中划痕的宽度数据来计算鳞状细胞的迁移率。
1.3研究方法：数据用SPSS20.0统计分析，计量资料采取正太分布的标准进行计算，实验计量资料数据均采取均数、标准差进行标识。P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1鳞状细胞RT-PCR检测结果数据：在MMP-9抑制剂0umol/L浓度时鳞状细胞的增殖数据为1.0，在MMP-9抑制剂浓度为5umol/L时鳞状细胞的增殖数据为0.5，说明MMP-9抑制剂能够明显抑制鳞状细胞的增殖功能，统计学差异明显（P<0.05）。
2.2鳞状细胞的划痕实验数据：在增殖24hMMP-9抑制剂5umol/L浓度时鳞状细胞的迁移率为16.48%、10umol/L浓度時迁移率为12.45%，对照组迁移率为32.81%。在48hMMP-9抑制剂浓度为10umol/L时鳞状细胞的迁移率为19.88%、10umol/L浓度时迁移率为13.68%，对照组迁移率为42.22%。统计学差异明显（P<0.05）。
3讨论
口腔鳞癌颈淋巴结转移是影响患者预后的重要因素[3]。肿瘤的转移是一个包含多个阶段的复杂进程，其中肿瘤细胞对基底膜的破坏从而允许其在组织之间移动是一个重要的因素，而基质金属蛋白酶对细胞外基质的调节和重塑起着关键的作用[4]。既往研究中，通过对MMP-9的抑制可以有效降低乳腺癌、食道癌、喉头癌等肿瘤细胞的增殖[5-8]。本实验中在设定MMP9抑制剂Oumol/L浓度时鳞状细胞的增殖数据为1.0，在MMP-9抑制剂浓度为5umol/L时鳞状细胞的增殖数据为0.5，说明MMP-9抑制剂能够明显抑制鳞状细胞的增殖功能。，且随着MMP-9抑制剂不断增加与细胞处理的时间不断延长，细胞迁移距离逐渐缩小并呈现相关性。
说明MMP-9抑制剂可以明显抑制增殖的肿瘤细胞摆脱基底膜的束缚、干预肿瘤细胞的增殖与侵袭能力，从而达到控制患者口腔肿瘤细胞增殖与侵袭的能力。
综上所述，口腔鳞状细胞经MMP-9抑制剂进行干预后可明显降低细胞增殖能力和侵袭能力，为临床研究提供重要理论依据。
参考文献
[1].张桂莲，宿颖，张辛燕.山竹醇对人口腔鳞癌细胞糖酵解代谢通路的影响.北京口腔医学，2017，25（2）：6670-6670.
[2].李文荟，郭莉，谭耀文，etal.口腔癌及癌前病变组织中MMP-9基因表达的意义[J].临床口腔医学杂志，2007，23（1）：27-28. [3].李曉明，邸斌，尚耀东，etal.ClinicopathologicFeaturesandPrognosticFactorsofCervicalLymphNodeMetastasisinOralSquamousCellCarcinoma%口腔鳞癌颈淋巴结转移的临床病理学特点及其对预后的影响[D].癌症，2005，24（2）：208-212.
[4].Jacob A.The regulation of MMP targeting to invadopodia during cancer metastasis[J.Frontiers in cell and developmental biology，2015， 3：4.DOI：10.3389/fcell.2015.00004
[5].Hallett MA， Teng B， HasegawaH ，et al.Anti-matrixmetalloproteinase9 DNAzymedecreasestumorgrowthintheMMTVPyMT mousemodelelof breast cancer.Breast Cancer R esearchBcr， 2013， 15（1）：R12-R12.
[6].Ren F，Tang R，Zhang X，et al.Overexpression of MMP Family Members Functions as Prognostic Biomarker for Breast Cancer Patients：A Systematic Reviewand Meta-Analysis[J]. PloS one， 2015， 10（8）：e0135544.DOI：10.1371l/journal.pone.0135544
[7]. Palumbo A，Meireles Da Costa N，Pontes B，et al.Esophageal Cancer Development： Crucial Clues Arising from the Extracellular Matrix[J].Cells，2020，9（2）：.DOI： 10.3390/cells9020455
[8].Grzelczyk WL，Szemraj J.The matrix metalloproteinase in larynxcancer[J].Postepy higieny i medycynydos’ wiadczalnej （Online）， 2016，70（0）：1190-1197.