微小RNA-19b-3p靶向作用卷曲螺旋结构域6对黑色素瘤细胞增殖、侵袭及小鼠肿瘤体积的影响

• 作 者: 潘东升 韩飞容 甘雨灵 李廷栋 梁鹏 付来华 宋建民
• 机 构: 甘肃省肿瘤医院骨科，兰州 730050,甘肃省肿瘤医院内镜中心，兰州 730050,甘肃省肿瘤医院骨科，兰州 730050,甘肃省肿瘤医院骨科，兰州 730050,甘肃省肿瘤医院骨科，兰州 73005
• 出 处: 中华实验外科杂志
• 发表日期: 2019年36期
• 关键词: 黑色素瘤 微小RNA 卷曲螺旋结构域6 侵袭 增殖

目的

探讨微小RNA(miRNA，miR)-19b-3p靶向调控卷曲螺旋结构域6(CCDC6)在黑色素瘤细胞增殖、侵袭及小鼠肿瘤体积的机制。

方法

收集黑色素瘤组织及健康人群痣组织各56例。实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)测定miR-19b-3p与CCDC6的相对表达量，细胞增殖与毒性(CCK-8)检测WM35细胞增殖能力，细胞侵袭实验检测WM35细胞侵袭能力，蛋白质印迹法(Western blot)检测CCDC6及磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白水平，荧光素酶报告分析验证miR-19b-3p与CCDC6关系，裸鼠肿瘤模型建立以探究miR-19b-3p对肿瘤体积的影响。应用SPSS 19.0统计软件分析，计数资料组间比较采用χ²检验。两两比较和多组间比较分别采用t检验和单因素方差分析，相关分析采用Pearson法。

结果

与良性痣组织(1.43±0.38)比较，黑色素瘤组织(2.89±0.46)中miR-19b-3p水平明显增加(t＝6.823，P<0.05)，且miR-19b-3p与Ⅲ/Ⅳ期(χ²＝12.087，P<0.05)及发生远处转移(χ²＝12.600，P<0.05)显著相关。与空白对照组[miR-19b-3p：1.16±0.28；细胞侵袭数：(26.35±4.73)个/HF]和miR对照组[miR-19b-3p：1.22±0.30；细胞侵袭数：(28.16±4.80)个/HF]比较，miR-19b-3p模拟物组[miR-19b-3p：4.06±0.28，t＝3.977，t＝4.003，P<0.05；细胞侵袭数：(49.64±5.11)个/HF，t＝3.981，t＝4.500，P<0.05]miR-19b-3p表达水平及细胞侵袭能力均显著增高(P<0.05)，而miR-19b-3p抑制剂组[miR-19b-3p：0.41±0.08，t＝3.771，t＝3.579，P<0.05；细胞侵袭数：(14.47±0.96)个/HF，t＝3.669，t＝4.004，P<0.05]miR-19b-3p表达水平及细胞侵袭能力均显著降低。CCK-8检测结果显示，在24、48、72 h时，miR-19b-3p模拟物组细胞的增殖能力显著增强，miR-19b-3p抑制剂组增殖能力显著下降(F＝4.026、4.609、7.446，P<0.05)。与miR对照组比较[体积：(467.34±36.75) mm³；CCDC6：1.00±0.12；miR-19b-3p：2.17±0.42]，miR-19b-3p模拟物组小鼠黑色素瘤组织的体积[(1 058.66±66.17) mm³]显著增加，CCDC6表达显著降低(0.42±0.08)，miR-19b-3p水平显著增加(4.01±0.66)，差异均有统计学意义(t＝22.836，t＝8.129，t＝10.663，P<0.05)。

结论

miR-19b-3p可促进黑色素瘤的侵袭与增殖，其机制与调控下游CCDC6及p-Akt密切相关。