【摘 要】
：
本研究旨在表达非洲猪瘟病毒(ASFV) pS273R蛋白,并制备其多克隆抗体,为ASFV pS273R的功能研究提供材料.试验通过大肠杆菌表达系统表达重组pS273R蛋白,采用镍亲和层析柱和分子筛纯化重组pS273R蛋白并免疫BALB/e小鼠制备血清,经Protein G琼脂糖树脂纯化鼠抗pS273R蛋白多克隆抗体,通过Western blotting、间接免疫荧光(IFA)和免疫沉淀试验(IP)分析多克隆抗体的反应原性和特异性.结果 显示,在16℃、1 mmol/L IPTG诱导条件下,pS273R蛋白
【机 构】
：
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,基础免疫创新团队,哈尔滨150069
论文部分内容阅读
本研究旨在表达非洲猪瘟病毒(ASFV) pS273R蛋白,并制备其多克隆抗体,为ASFV pS273R的功能研究提供材料.试验通过大肠杆菌表达系统表达重组pS273R蛋白,采用镍亲和层析柱和分子筛纯化重组pS273R蛋白并免疫BALB/e小鼠制备血清,经Protein G琼脂糖树脂纯化鼠抗pS273R蛋白多克隆抗体,通过Western blotting、间接免疫荧光(IFA)和免疫沉淀试验(IP)分析多克隆抗体的反应原性和特异性.结果 显示,在16℃、1 mmol/L IPTG诱导条件下,pS273R蛋白以可溶形式高效表达,经纯化并免疫小鼠后,通过Protein G可以纯化出高质量的鼠抗pS273R的多克隆抗体.以制备的多克隆抗体为一抗,通过Western blotting、IFA和IP检测到HEK293T细胞中瞬时表达的Flag-pS273R蛋白和ASFV感染肺泡巨噬细胞(PAMs)中的pS273R蛋白.本研究在大肠杆菌中实现了ASFV pS273R蛋白的高效表达,制备并纯化的抗pS273R多克隆抗体具有较高的反应性和特异性,这为深入探讨ASFV pS273R蛋白的生物学功能奠定了基础.
其他文献
研究旨在揭示香猪卵巢组织中circ_CSPP1的潜在功能.利用CIRI-full拼接circ_CSPP1的序列,circBase数据库在线blat分析circ_CSPP1的保守性,采用RT-PCR和Sanger测序技术从香猪卵巢分离和鉴定circ.CSPP1,采用miRanda、RNAhybrid和PITA软件预测和分析circ_CSPP1结合的miRNA分子及miRNA的靶基因,对靶基因进行GO和KEGG富集分析.结果 显示,分离到的circ_CSPP1是保守的,由CSPP1基因的外显子8～12组成,可
探讨核旁斑组装转录本1(NEAT1)在小鼠早期妊娠子宫组织中的表达和调节,为揭示NEAT1在小鼠胚胎着床过程中的作用机制提供科学依据.分别构建小鼠早期妊娠、假孕、人工诱导蜕膜化和类固醇激素处理模型,采用RNA原位杂交以及实时荧光定量PCR技术检测NEAT1在上述模型子宫组织的定位与表达.结果 显示,NEAT1在小鼠早期妊娠子宫组织中呈现动态变化规律,在妊娠1～5 d的子宫内膜组织和肌层组织中均有表达,且主要表达于子宫内膜腔上皮细胞和腺上皮细胞;在妊娠6～8 d的子宫组织中NEAT1主要表达于蜕膜化细胞,而
研究通过检测鞘磷脂对小鼠肌卫星细胞C2C12成肌分化的影响,旨在为阐明鞘磷脂对解偶联蛋白1(UCP1)基因敲入猪骨骼肌生长的影响提供理论依据.用ELISA法检测野生型猪和UCP1敲入猪背部肌肉及血清中总鞘磷脂含量;利用CCK8法检测不同浓度(0、5、20、50和100 μg/mL)鞘磷脂对C2C12细胞增殖和毒性的影响,并通过形态学观察和分化前后细胞成肌分化标记基因生肌因子5(Myf5)、生肌决定因子(MyoD)、肌细胞生成素(Myogenin)、生肌调节因子4(MRF4)的表达检测,建立C2C12成肌分
试验旨在构建新疆褐牛不同生长阶段体尺体重性状的遗传参数估计模型,估计新疆褐牛生长发育性状的遗传参数,为新疆褐牛育种目标性状的确定和综合选择指数的制定提供理论依据.以1983-2017年收集的4个新疆褐牛核心育种场81头公牛后代的2504条新疆褐牛体尺体重数据为研究材料,以初生及6、12和18月龄阶段的体重、体高、体斜长和胸围性状为研究对象,通过DMU软件构建多性状动物模型,以场、出生年份、出生季节和性别为固定效应,以加性效应和母体效应为随机效应,估计各性状的遗传力和遗传相关.结果 显示,新疆褐牛初生至18
为了提高难溶性药物烯丙孕素(altrenogest,ALT)的水溶性,本试验采用冷冻干燥法来制备烯丙孕素-羟丙基-β-环糊精(ALT-HP-β-CD)及其衍生物2,6-二甲基-β-环糊精(DIME-β-CD)包合物载药体系,并对ALT的线性关系和专属性、仪器的精密度以及包合物的回收率和稳定性进行了测定.以包合物的收率和包合物中ALT的包合率为评价指标,采用正交试验设计优选2种包合物的最佳制备条件,并使用傅里叶变换红外光谱法、热重分析法和显微镜成像法对所制得的ALT包合物进行表征分析,采用溶解度法测定包合物
研究旨在克隆努比亚山羊生肌因子6(Myf6)基因,并对其进行生物信息学分析,检测Myf6基因在努比亚山羊不同组织的表达差异以及努比亚山羊和隆林山羊背最长肌组织的表达差异.以努比亚山羊背最长肌组织cDNA为模板,PCR扩增获得Myf6基因的完整编码区(CDS)后进行菌液验证,并进行序列相似性比对以及系统进化树构建;分析Myf6蛋白理化性质并预测其亲/疏水性,预测蛋白二级结构和三级结构.采用实时荧光定量PCR检测Myf6基因在努比亚山羊心脏、肝脏、脾脏、肾脏、背最长肌、皮下脂肪、瘤胃以及隆林山羊背最长肌中的表
雌性生殖细胞进行减数分裂时易发生染色体分离错误而产生非整倍体卵母细胞,其受精后会产生非整倍体胚胎,导致出生缺陷或胚胎致死,是影响哺乳动物繁殖的重要因素.卵母细胞在第一次减数分裂前期发生同源染色体联会,此时DNA双链断裂引发重组.重组时缺乏交叉、重组事件数量的减少及交叉靠近端粒或着丝粒导致染色体发生同向分离或不分离,从而产生非整倍体卵母细胞.减数分裂期间,当染色体的端粒共向于同一极或没有完全附着在纺锤体微管上时,纺锤体组装检查点(spindle assembly checkpoint,SAC)被激活,E3泛
本试验旨在探索用谷氨酰胺(Gln)替代部分甘油对冻融猪精子体外获能和受精能力的影响,试验分为6组:3％甘油对照组和5个处理组(Ⅰ～V组:2％甘油+谷氨酰胺(0、20、40、80和100 mmol/L)).对冻融松辽黑猪精子的精子活力、质膜完整性、顶体完整性、线粒体膜电位、鱼精蛋白水平、获能及体外受精等指标进行了检测.结果 显示,用谷氨酰胺替代部分甘油均对冻融精子质量有一定的改善作用,改善的程度受谷氨酰胺浓度的影响.与对照组相比,Ⅰ组精子的质量参数均显著下降(P＜0.05);与Ⅰ组相比,Ⅱ组精子活力、顶体完
雌性动物的繁殖潜力基于卵泡的发育,该过程受到复杂的基因网络调控.microRNA(miRNA)是一种短的、非编码RNA,在转录后调控基因表达.在过去的十年中,对动物卵泡中非编码RNA的深入研究揭示了miRNA在卵泡发育过程中的关键作用.作者简述了雌性动物卵泡发育过程,总结了miRNA调控卵泡发育的作用机制,包括原始卵泡的激活、生长卵泡的发育选择、卵泡颗粒细胞和卵泡膜细胞的生长调控等,分析了卵泡液外囊泡携带miRNA的功能.但当前卵泡miRNA的研究多集中在细胞敲低模型研究,敲除模型研究较少,因此增加细胞及
为了解猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV) CH7328株的致病性,并分析其基因变异和遗传演变规律,试验通过病毒培养、间接免疫荧光试验(IFA)、病毒生长曲线及仔猪致病性试验鉴定病毒的生长特性和致病性,并分析该毒株的全基因组序列.结果 显示,感染PDCoV CH7328株的ST细胞出现肿大变圆、细胞呈碎玻璃状且拉丝、细胞集聚成簇和脱落等病变.IFA结果显示,PDCoV CH7328株主要分布在细胞质中.生长曲线结果显示,PDCoV CH7328株在6h就已开始增