论文部分内容阅读
摘 要：目的 建立马鞭草中环烯醚萜苷的含量测量方法。方法 采用紫外分光光度法，以当药苦苷为对照品，高氯酸-5%香草醛冰醋酸为显色剂，在275nm处测定其含量。结果 当药苦苷显色化合物稳定，在0.05-0.35mg/ml范围内有良好的线性关系Y=19.622X+0.3206（R2=0.9989）;平均回收率为100.04%，RSD<2%。结论 该实验建立了高氯酸-5%香草醛冰醋酸比色法测定马鞭草中环烯醚萜苷含量的方法，该方法较为可靠且简便，可以作为马鞭草中环烯醚萜苷含量测量的方法。
关键词：马鞭草;环烯醚萜苷;分光光度法;含量测定
马鞭草（Verbena officinalis L）为马鞭草科多年生植物，又名紫顶龙牙草、燕尾草，多年生直立草本植物。其全株均可供药用，有清热解毒、活血散瘀、利水消肿等功效。现代研究表明马鞭草具有消炎、止痛、止血、抗菌等作用[1]。马鞭草中含有黄酮类、环烯醚萜类、甾体类等化合物[2-4]。环烯醚萜是植物中存在的一大类化合物，具有广泛得药理活性[5-6]。目前马鞭草的研究主要集中在化学成分提取分离鉴定方面，采用分光光度法测定马鞭草中环烯醚萜苷的方法未见文献报道。分光光度法[7]是一种测定含量的测量方法，本实验将采用分光光度法建立马鞭草提取物中总环烯醚萜苷的含量测定方法[8-11]。
1 仪器与试剂
1.1 仪器
SPECORD50型紫外分光光度计、AB204-S型电子分析天平（METTLER TOLEDO）、KQ-300DV型超声波发生器（昆山市超声波仪器有限公司）、WKYⅢ-100移液枪（ADJUSTABLEPIPETTE）、HH-S1型数显恒温水浴锅（江苏正基仪器有限公司）
1.2 试剂
马鞭草粉末、当药苦苷对照品（RP190717）、香草醛、冰醋酸、高氯酸、无水乙醇（均为市售分析纯）
2 方法
2.1 供试品配置
取马鞭草粉末，过5号筛，精确称取粉末2.0g。加入50ml容量瓶中用30%乙醇定容，精确称量重量。超声波30°C、提取45min，冷却至室温，补足失重。过滤，取滤液0.10ml于10ml容量瓶中，乙醇定容。
2.2 对照品品配置
精确称取10.0mg当药苦苷于10ml容量瓶中，30%乙醇定容。
2.3 吸收波长选择
取对照品溶液和供试品溶液各0.1ml，经高氯酸-5%香草醛冰醋酸法显色后在200～700nm间进行扫描，得到吸收曲线见图1，比较后，选取最适宜的吸收波长275nm。
2.4 线性关系考察
分别移取对照品溶液0.05ml、0.10ml、0.15ml、0.20ml、0.25ml于10ml容量瓶中，经显色后，在最大吸收波长处测定吸光度值。绘制出吸收曲线，计算得回归方程为Y=19.622X+0.3206（R2=0.9989）
2.5 稳定性实验
取供试品0.1ml，经显色后，30min内每隔5min记录吸光度值，并记录0min、30min、60min、120min、240min、480min时的吸光度值见下表1，结算得RSD=1.20%（n=14），说明该供试品在480min内稳定性较好。
2.6 精密度实验
取供试品溶液0.1ml，经显色后，在15分钟时连续测定5次吸光度值，实验数据见表2 ，RSD=0.00%，说明该方法得精密性良好。
2.7 重复性实验
精确称取供试品5份，每份0.1ml，经显色后，测定吸光度值，数据记录见表3其平均含量为22.20%，计算得到RSD=1.95%（n=5），数据表明方法重复性较好。
2.8 回收率实验
分别取含量已知且不同的供试品溶液3份，分别加入已知浓度的样品里加入该样品量的80%、100%、120%的对照品，经上述显色步骤后，测定吸光度值，记录数据、填入表格（见表4），计算得平均回收率为100.04%，RSD<2%，回收率较好，该方法可行。
3 讨论
环烯醚萜苷是中药材中重要的活性成分[12]，本实验以马鞭草根茎中的提取物为主要研究对象，探究利用紫外分光光度法定量测定其提取物中总环烯醚萜苷含量的方法，而后经稳定性、精密度、重复性、加样回收率等一系列的考察，验证了方法的可行性，从而建立了一种简便、可靠的测定方法，为其他测定中草药中总环烯醚萜苷含量的研究提供了参考。
参考文献
[1]杨勇勋.马鞭草科石梓属植物化学成分及药理作用研究进展[J].亚太传统医药，2018，14（03）：68-72.
[2]张建业. 马鞭草化学成分及红花指纹图谱的研究[D].郑州大学，2005.
[3]徐伟，辛菲，刘明，等.马鞭草裂环环烯醚萜苷类成分的分离与鉴定[J].沈阳药科大学学报，2010，27（10）：793-796.
[4]张涛，阮金兰，吕子敏.马鞭草环烯醚萜苷类成分的研究[J].中草药，2000（10）：3-5.
[5]邓家刚，周小雷.马鞭草化学成分和药理作用研究进展[J].广西中医药，2005（02）：1-3.
[6]薛长松，徐晶，李萃萍，等.环烯醚萜苷类化合物体内代谢及代谢物药理活性研究进展[J].中国中药杂志，2018，43（01）：39-45.
[7]國家药典委员会.中华人民共和国药典[M].版本（2015版）.北京：中国医药科技出版社，2015，04（01）：38-40.
[8]周婷婷，闻俊，佟典承，等.栀子总环烯醚萜苷含量的紫外分光光度法测定[J].时珍国医国药，2011，22（02）：273-275.
[9]杨洋，孙文基，张锦，等.秦艽不同提取物中3种环烯醚萜苷的含量测定[J].西北大学学报（自然科学版），2016，46（06）：861-865.
[10]崔春利，王月茹，王敏，等.秦艽药材及其提取物中总裂环环烯醚萜苷的含量测定[J].陕西中医学院学报，2011，34（06）：75-77.
[11]王赟，李朝晖，华春.中药栀子总环烯醚萜苷的含量测定[J].安徽农业科学，2011，39（21）：12859-12860.
[12]王菲菲，张聿梅，郑笑为，等.环烯醚萜类化合物的结构和生物学活性研究进展[J].中国药事，2019，33（03）：323-330.
基金项目：由西北民族大学本科生科研立项资助 XBMU_BYL19020
关键词：马鞭草;环烯醚萜苷;分光光度法;含量测定
马鞭草（Verbena officinalis L）为马鞭草科多年生植物，又名紫顶龙牙草、燕尾草，多年生直立草本植物。其全株均可供药用，有清热解毒、活血散瘀、利水消肿等功效。现代研究表明马鞭草具有消炎、止痛、止血、抗菌等作用[1]。马鞭草中含有黄酮类、环烯醚萜类、甾体类等化合物[2-4]。环烯醚萜是植物中存在的一大类化合物，具有广泛得药理活性[5-6]。目前马鞭草的研究主要集中在化学成分提取分离鉴定方面，采用分光光度法测定马鞭草中环烯醚萜苷的方法未见文献报道。分光光度法[7]是一种测定含量的测量方法，本实验将采用分光光度法建立马鞭草提取物中总环烯醚萜苷的含量测定方法[8-11]。
1 仪器与试剂
1.1 仪器
SPECORD50型紫外分光光度计、AB204-S型电子分析天平（METTLER TOLEDO）、KQ-300DV型超声波发生器（昆山市超声波仪器有限公司）、WKYⅢ-100移液枪（ADJUSTABLEPIPETTE）、HH-S1型数显恒温水浴锅（江苏正基仪器有限公司）
1.2 试剂
马鞭草粉末、当药苦苷对照品（RP190717）、香草醛、冰醋酸、高氯酸、无水乙醇（均为市售分析纯）
2 方法
2.1 供试品配置
取马鞭草粉末，过5号筛，精确称取粉末2.0g。加入50ml容量瓶中用30%乙醇定容，精确称量重量。超声波30°C、提取45min，冷却至室温，补足失重。过滤，取滤液0.10ml于10ml容量瓶中，乙醇定容。
2.2 对照品品配置
精确称取10.0mg当药苦苷于10ml容量瓶中，30%乙醇定容。
2.3 吸收波长选择
取对照品溶液和供试品溶液各0.1ml，经高氯酸-5%香草醛冰醋酸法显色后在200～700nm间进行扫描，得到吸收曲线见图1，比较后，选取最适宜的吸收波长275nm。
2.4 线性关系考察
分别移取对照品溶液0.05ml、0.10ml、0.15ml、0.20ml、0.25ml于10ml容量瓶中，经显色后，在最大吸收波长处测定吸光度值。绘制出吸收曲线，计算得回归方程为Y=19.622X+0.3206（R2=0.9989）
2.5 稳定性实验
取供试品0.1ml，经显色后，30min内每隔5min记录吸光度值，并记录0min、30min、60min、120min、240min、480min时的吸光度值见下表1，结算得RSD=1.20%（n=14），说明该供试品在480min内稳定性较好。
2.6 精密度实验
取供试品溶液0.1ml，经显色后，在15分钟时连续测定5次吸光度值，实验数据见表2 ，RSD=0.00%，说明该方法得精密性良好。
2.7 重复性实验
精确称取供试品5份，每份0.1ml，经显色后，测定吸光度值，数据记录见表3其平均含量为22.20%，计算得到RSD=1.95%（n=5），数据表明方法重复性较好。
2.8 回收率实验
分别取含量已知且不同的供试品溶液3份，分别加入已知浓度的样品里加入该样品量的80%、100%、120%的对照品，经上述显色步骤后，测定吸光度值，记录数据、填入表格（见表4），计算得平均回收率为100.04%，RSD<2%，回收率较好，该方法可行。
3 讨论
环烯醚萜苷是中药材中重要的活性成分[12]，本实验以马鞭草根茎中的提取物为主要研究对象，探究利用紫外分光光度法定量测定其提取物中总环烯醚萜苷含量的方法，而后经稳定性、精密度、重复性、加样回收率等一系列的考察，验证了方法的可行性，从而建立了一种简便、可靠的测定方法，为其他测定中草药中总环烯醚萜苷含量的研究提供了参考。
参考文献
[1]杨勇勋.马鞭草科石梓属植物化学成分及药理作用研究进展[J].亚太传统医药，2018，14（03）：68-72.
[2]张建业. 马鞭草化学成分及红花指纹图谱的研究[D].郑州大学，2005.
[3]徐伟，辛菲，刘明，等.马鞭草裂环环烯醚萜苷类成分的分离与鉴定[J].沈阳药科大学学报，2010，27（10）：793-796.
[4]张涛，阮金兰，吕子敏.马鞭草环烯醚萜苷类成分的研究[J].中草药，2000（10）：3-5.
[5]邓家刚，周小雷.马鞭草化学成分和药理作用研究进展[J].广西中医药，2005（02）：1-3.
[6]薛长松，徐晶，李萃萍，等.环烯醚萜苷类化合物体内代谢及代谢物药理活性研究进展[J].中国中药杂志，2018，43（01）：39-45.
[7]國家药典委员会.中华人民共和国药典[M].版本（2015版）.北京：中国医药科技出版社，2015，04（01）：38-40.
[8]周婷婷，闻俊，佟典承，等.栀子总环烯醚萜苷含量的紫外分光光度法测定[J].时珍国医国药，2011，22（02）：273-275.
[9]杨洋，孙文基，张锦，等.秦艽不同提取物中3种环烯醚萜苷的含量测定[J].西北大学学报（自然科学版），2016，46（06）：861-865.
[10]崔春利，王月茹，王敏，等.秦艽药材及其提取物中总裂环环烯醚萜苷的含量测定[J].陕西中医学院学报，2011，34（06）：75-77.
[11]王赟，李朝晖，华春.中药栀子总环烯醚萜苷的含量测定[J].安徽农业科学，2011，39（21）：12859-12860.
[12]王菲菲，张聿梅，郑笑为，等.环烯醚萜类化合物的结构和生物学活性研究进展[J].中国药事，2019，33（03）：323-330.
基金项目：由西北民族大学本科生科研立项资助 XBMU_BYL19020