【摘 要】
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目的 高度降解DNA的遗传检验分析,一直是多个学科领域的难题之一.本文报道一种从降解模板制备较大片段DNA的新方法—中间产物拼接扩增法(IMSA).方法 首先,以高度降解DNA为模
【机 构】
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铁道警察学院刑事科学技术系,郑州450053;抚顺市公安局刑侦支队检验鉴定中心,辽宁抚顺113006
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目的 高度降解DNA的遗传检验分析,一直是多个学科领域的难题之一.本文报道一种从降解模板制备较大片段DNA的新方法—中间产物拼接扩增法(IMSA).方法 首先,以高度降解DNA为模板,使用短小扩增子PCR技术,分组合成末端相互重叠的小片段初始扩增产物(＜165 bp);而后,将小片段初始扩增产物混合物作为次级模板,以80℃退火进行酶促延伸循环,逐步拼接成长度不等的中间产物(208～316 bp),最终生成大片段扩增终产物(422 bp);随后,用最外侧引物,对大片段IMSA终产物进行PCR倍增.最后,对IMSA终产物进行测序,验证其扩增可靠性.使用甲醛固定石蜡包埋组织DNA样品,验证IMSA方法的实用性.结果 IMSA终产物与参照DNA扩增产物长度均为422bp,测序序列完全一致,终产物序列完全忠实于来源DNA.使用本文方法,对于陈旧的甲醛固定石蜡包埋组织,成功实现了较大片段终产物(422bp)的扩增分析.结论 针对高度降解DNA缺少大片段扩增模板的问题,本文IMSA方法可以直接拼接合成大片段DNA终产物,预期在法医、考古、病理等领域有较好的应用前景.
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