【摘 要】
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目的观察体外培养血管瘤血管内皮细胞的凋亡与Caspase-8、Fas的关系,探讨血管瘤血管内皮细胞的凋亡通路。方法应用组织块法培养血管瘤血管内皮细胞,待长成单层细胞以后传代,
【机 构】
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遵义医学院附属医院小儿矫形外科,济南市长清区人民医院,
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目的观察体外培养血管瘤血管内皮细胞的凋亡与Caspase-8、Fas的关系,探讨血管瘤血管内皮细胞的凋亡通路。方法应用组织块法培养血管瘤血管内皮细胞,待长成单层细胞以后传代,建立血管瘤血管内皮细胞系,观察其增殖特征,并用第Ⅷ凝血因子相关抗原进行鉴定。收集以上培养的细胞,顺序加入膜联蛋白-V-异硫氰酸荧光素及碘化丙锭溶液双染色上机,Cell Quest软件分析结果,同期取相同状态细胞,用流式细胞仪检测Caspase-8的表达,免疫组织化学法检测Fas的表达,Fas以细胞膜及细胞质出现红色为阳性细胞。比较Caspase-8、Fas在血管瘤血管内皮细胞离体培养过程中不同时期的表达情况。结果培养的血管瘤血管内皮细胞于24 h后开始贴壁生长,1周后只有少量细胞铺展贴壁生长,2周后开始生长分裂,3周后开始快速生长,4周后细胞铺满板底。相差倒置显微镜观察,发现所分离的内皮细胞呈上皮细胞形态。培养细胞第Ⅷ凝血因子相关抗原表达为阳性。血管瘤血管内皮细胞凋亡率高时[(18.88±3.32)%],Caspase-8、Fas呈高表达;血管瘤血管内皮细胞凋亡率低时[(3.25±0.23)%],Caspase-8、Fas呈低表达,血管瘤血管内皮细胞高凋亡率与低凋亡率比较差异有统计学意义(t=10.34 P<0.01)。结论Caspase-8、Fas参与了体外培养人血管瘤内皮细胞凋亡的调节,体外培养血管瘤内皮细胞的凋亡可能是通过死亡受体通路来实现的。
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