【摘 要】
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目的:探讨蛋白激酶B(Akt)过表达对毛兰素抑制人膀胱癌细胞5637增殖作用的影响及相关机制.方法:运用慢病毒载体建立5637细胞Akt稳定过表达株,并进行如下分组,以空载体感染5637细胞作为空白组,Akt组,空载体加药组(毛兰素62.5μg·L-1),Akt加药组(毛兰素62.5μg·L-1);采用细胞增殖与活性检测(CCK-8)法测定细胞活性;通过克隆形成实验检测各组5637细胞克隆形成情况;进行流式细胞术检测,评价细胞周期分布情况;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测磷酸化(p)-A
【机 构】
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桂林医学院基础医学院,广西桂林541199;桂林医学院附属医院,广西桂林541001;深圳市龙华区中心医院,广东深圳518110
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目的:探讨蛋白激酶B(Akt)过表达对毛兰素抑制人膀胱癌细胞5637增殖作用的影响及相关机制.方法:运用慢病毒载体建立5637细胞Akt稳定过表达株,并进行如下分组,以空载体感染5637细胞作为空白组,Akt组,空载体加药组(毛兰素62.5μg·L-1),Akt加药组(毛兰素62.5μg·L-1);采用细胞增殖与活性检测(CCK-8)法测定细胞活性;通过克隆形成实验检测各组5637细胞克隆形成情况;进行流式细胞术检测,评价细胞周期分布情况;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测磷酸化(p)-Akt,Akt,p21蛋白表达;进行糖摄取测定实验和乳酸分泌实验,检测5637细胞糖酵解情况.结果:与空白组比较,毛兰素可以抑制膀胱癌5637细胞的增殖(P＜0.05),过表达Akt能部分逆转毛兰素对膀胱癌5637细胞的增殖抑制作用(P＜0.05).与空白组比较,毛兰素可以抑制膀胱癌5637细胞的克隆形成(P＜0.05),过表达Akt能部分逆转毛兰素对膀胱癌5637细胞的克隆形成抑制作用(P＜0.05).与空白组比较,毛兰素能诱导膀胱癌5637细胞DNA合成前期(G1期)阻滞(P＜0.05),过表达Akt能逆转毛兰素对5637细胞的周期阻滞作用(P＜0.05).与空白组比较,毛兰素可以促进p21蛋白表达并抑制p-Akt,Akt蛋白表达(P＜0.05),过表达Akt能够逆转毛兰素对p21蛋白表达的上调作用(P＜0.05).与空白组比较,毛兰素能抑制膀胱癌细胞5637的葡萄糖摄取和乳酸分泌(P＜0.05),过表达Akt能够逆转毛兰素对5637细胞糖酵解的抑制作用(P＜0.05).结论:毛兰素对膀胱癌细胞5637增殖具有抑制作用,可以促进p21表达并抑制p-Akt的表达;Akt过表达可逆转毛兰素对膀胱癌细胞5637的增殖抑制作用.提示Akt在毛兰素抑制5637细胞增殖过程中发挥着重要作用,为毛兰素应用于膀胱癌治疗提供了新的靶向依据.
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