丁香提取物对放射抗拒食管癌细胞的体外抗肿瘤作用及机制研究

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目的 探讨丁香提取物(clove extract,CE)对放射抗拒食管癌细胞KYSER的体外抗肿瘤疗效及其机制.方法 制备丁香花蕾乙醇提取物,采用气相色谱法鉴定CE中的主要活性组分;采用体外细胞培养法观察不同浓度CE对食管癌放射抗拒细胞KYSER生长的影响;采用噻唑蓝法检测不同浓度CE对KYSER存活的影响及方式;采用透射电子显微镜观察CE处理KYSER后细胞器微观结构的变化;采用Transwell小室法检测CE对KYSER迁徙能力的影响;采用流式细胞术定量测定CE诱导KYSER的凋亡率及细胞周期分布;采用克隆形成实验检测CE处理后,KYSER的克隆形成能力变化.结果 气相色谱法显示:CE的主要成分为丁香酚、丁香油烃和乙酸丁香酚酯.体外细胞培养法观察到:0.4%CE即可对KYSER生长产生抑制作用.噻唑蓝法显示:CE浓度≥0.5%时即可对KYSER的存活起到抑制作用,抑制作用呈明显的浓度依赖性.透射电子显微镜观察到:0.5%CE处理KYSER后,肿瘤细胞微绒毛变短、变宽,细胞质中核糖体减少,线粒体萎缩,形成大量自噬小体.Transwell跨膜迁徙实验显示:0.5%和0.6%的CE处理细胞后,KYSER迁徙率分别为对照的(65±4)%和(41±3)%,分别与对照组比,差异均有统计学意义(P均<0.001).流式细胞术凋亡检测显示:对照组、0.5%CE和0.6%CE处理组细胞的凋亡率分别为(5.63±0.50)%、(11.77±0.42)%和(19.44±0.19)%,处理组与对照组相比差异均有统计学意义(P均<0.001).流式细胞术细胞周期检测显示:对照组、0.5%CE处理组和0.6%CE处理组细胞G,期比例分别为(61.99±1.20)%、(75.38±1.50)%和(78.81±1.00)%,处理组分别与对照组相比,差异均有统计学意义(P均<0.001).克隆形成实验显示:CE处理细胞24h后,对照组、0.5%CE处理组和0.6%CE处理组细胞克隆形成率分别为(80.5±1.0)%、(18.1±0.8)%和(5.0±0.5)%,处理组与对照组相比,差异有统计学意义(P均<0.001).结论 CE可通过诱导细胞自噬和促进凋亡、细胞周期阻滞、抑制细胞能量代谢、抑制迁徙等机制发挥对放射抗拒食管癌细胞的抗肿瘤作用.
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