【摘 要】
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目的 研究Fas激活的丝氨酸/苏氨酸激酶(Fas-activated serine/threonine kinase,FASTK)在缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤导致的心肌细胞线粒体呼吸功能障碍中的作用.方法 分离(1-2)d的野生C57BL/6小鼠原代心肌细胞并进行体外培养.转染对照或FASTK过表达的腺病毒后,心肌细胞接受H/R损伤.分别采用Western blot和RT-PCR检测FASTK蛋白和mRNA表达水平,采用Seahorse能量分析仪检测心肌细胞线粒体
【机 构】
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空军军医大学基础医学院学员六大队,陕西西安710032;空军军医大学西京医院心血管内科,陕西西安710032;空军军医大学西京医院老年病科,陕西西安710032
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目的 研究Fas激活的丝氨酸/苏氨酸激酶(Fas-activated serine/threonine kinase,FASTK)在缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤导致的心肌细胞线粒体呼吸功能障碍中的作用.方法 分离(1-2)d的野生C57BL/6小鼠原代心肌细胞并进行体外培养.转染对照或FASTK过表达的腺病毒后,心肌细胞接受H/R损伤.分别采用Western blot和RT-PCR检测FASTK蛋白和mRNA表达水平,采用Seahorse能量分析仪检测心肌细胞线粒体呼吸功能,采用caspase-3活性检测试剂盒、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性检测试剂盒、MTT细胞活力检测试剂盒评估心肌细胞存活情况.结果 较常氧组,H/R损伤导致心肌细胞FASTK蛋白和mRNA表达显著降低(均P＜ 0.01).转染FASTK过表达腺病毒可显著上调心肌细胞FASTK蛋白和mRNA水平(均P＜ 0.01).H/R损伤抑制心肌细胞基础和最大线粒体氧耗率并降低三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)生成速率(均P＜ 0.01),而FASTK过表达可显著减轻H/R导致的线粒体呼吸功能障碍(均P＜ 0.001).FASTK过表达抑制了caspase-3活化,也显著减轻了H/R损伤导致的心肌细胞死亡和LDH释放(均P＜ 0.001).结论 过表达FASTK可显著减轻H/R损伤导致的心肌细胞线粒体呼吸功能障碍.
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