人胰蛋白酶原-2在大肠杆菌中的表达、纯化与活性测定

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胰蛋白酶原-2是急性胰腺炎相关的敏感而特异的标志物,并且与多种肿瘤转移的过程密切相关.对胰蛋白酶原-2基因5'端4个氨基酸的密码子碱基进行简并突变,并在其3'端连接6个组氨酸编码序列构建含重组质粒pBVTg2的大肠杆菌工程菌─pBVTg2/DH5α.重组大肠杆菌经温度诱导后获得了高效表达,重组蛋白占总菌体蛋白的20%,并以包涵体形式存在.包涵体经尿素缓冲液裂解后,通过Ni-NTA亲和树脂一步分离纯化. 纯化蛋白经SDS-PAGE分析及利用anti-histidine mAb进行Western blotti
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