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摘要 对赤峰市8个蔬菜大棚集中区土壤中微生物的种类和数量进行了研究，探索不同蔬菜大棚区土壤微生物的变化。试验分别培养每份土壤中的细菌、真菌、放线菌，并于2、4、6 d后分别统计细菌、真菌、放线菌的菌落数，同时对真菌分离物进行形态学鉴定。结果表明，青霉、曲霉、镰刀菌3个属是土壤中常见的真菌，数量较多，占整个真菌总数的91.95%。大棚土壤微生物的种类、数量与大棚种植时间长短、种植作物以及是否连作密切相关。大棚种植时间长，微生物数量高；连作则微生物数量较低。
关键词 蔬菜大棚；土壤微生物；种类；数量；内蒙古赤峰
中图分类号 S154.3 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2017）16-0163-01
Abstract To study the differences of soil microorganism in different vegetable greenhouses，the species and quantity of soil microorganism of eight vegetable greenhouse in different areas of Chifeng City were detailed in this paper.The bacterium，fungi and actinomycetes of soil were cultivated，counted in 2，4，and 6 days after cultivated，and the fungi were identified in microscope.The results showed that the Penicillum，Aspergillus and Fusarium were the most，91.95% in fungi.The species and quantity of soil microorganism were related with the used time of greenhouse，species of crop and continuous cropping.The quantity of soil microorganism of long used greenhouse was more，continuous cropping greenhouse was less.
Key words vegetable greenhouse；soil microorganism；species；quantity；Chifeng Inner Mongolia
赤峰市地处内蒙古中东部，设施蔬菜面积达6.67万hm2以上[1]。随着设施蔬菜生产的发展和蔬菜大棚的特殊环境，蔬菜病害成为影响大棚蔬菜产量和品质的重要因素。尤其是随着连作年限的增加，土壤中病原微生物积累，导致近年来各类蔬菜的根腐病、疫病等土传病害日益严重[2]，而土壤是微生物存活和传播的重要途径。因此，研究蔬菜大棚这一特殊生态环境的土壤微生物区系，了解其种群特点，对于促进大棚生产有重要意义[3]。随着蔬菜大棚种植年限的增长，各类蔬菜的病害种类越来越多，而且由于赤峰市各个蔬菜主产区每年种植蔬菜种类不同，导致病害千变万化。本研究探索赤峰市不同地区蔬菜大棚土壤微生物群落的组成情况，旨在为进一步防治蔬菜病害研究提供依据。
1 材料与方法
1.1 土壤样本采集
2016年8月，在赤峰市当铺地设施蔬菜园区、全家梁万亩蔬菜园区、王爷府冷棚蔬菜种植区、榆树湾蔬菜园区、大城子蔬菜产业园区、小城子蔬菜产业园区、元宝山蔬菜种植区、红山区设施农业产业园区的8个蔬菜大棚集中区采集土壤样本，取0～20 cm表土。样品分别用代号1～8表示。
1.2 培养基制备
细菌培养基（LB培养基）：酵母膏5 g，蛋白胨10 g，氯化钠10 g，琼脂10～20 g，蒸馏水1 000 mL。
真菌培养基（马铃薯葡萄糖琼脂培养基，PDA）：马铃薯200 g，葡萄糖20 g，琼脂17～20 g，蒸馏水1 000 mL。
放线菌培养基（高氏一号培养基）：淀粉20 g，硝酸钾1 g，氯化钠0.5 g，磷酸氢二钾0.5 g，七水合硫酸镁0.5 g，七水合硫酸亚铁0.01 g，琼脂 15 g，蒸馏水1 000 mL。
1.3 土壤微生物分离、培养和鉴定
采用稀释平板法[4]进行土壤微生物分离。从每个大棚土壤样本中取出50 g，加入200 mL无菌水，搅拌均匀，将土壤配成25%土壤悬浮液。放于摇床上振荡30 min，然后静置5 min，吸取1 mL上清液于离心管中，加入9 mL无菌水，将土壤稀释成10-1浓度，依次将土壤稀释成10-2、10-3、10-4浓度。真菌选择10-1浓度涂板，细菌选择10-4浓度涂板，放线菌选择10-3浓度涂板，各取120 mL土壤溶液进行涂板，每菌涂板3个。放于28 ℃培养箱中恒温培养。细菌、真菌、放线菌分别于培养2、4、6 d后开始统计菌落数，对真菌的每个菌落进行镜检，在显微镜下观察菌丝、孢子梗、孢子等结构的形态，根据所观察的真菌形态特征作分类检索，确定真菌属名。
2 结果与分析
2.1 土壤微生物的数量与组成
从表1可知，赤峰市8个蔬菜大棚集中区1 g大棚土壤含微生物總量平均为1.34×108 cfu，其中细菌1.24×108 cfu，放线菌9.65×106 cfu，真菌3.40×104 cfu。全家梁万亩蔬菜园区大棚微生物总数最低，其中细菌数量最低，可能是该大棚常年种植番茄，几乎不倒茬，单一种植方式导致微生物数量较低[5-9]。榆树湾设施蔬菜园区和红山区设施农业产业园区大棚土壤放线菌数量较多，可能是这2个大棚前茬作物均为白菜类，其根系分泌物有利于放线菌繁殖和积累。王爷府冷棚蔬菜种植区和榆树湾蔬菜园区大棚真菌数量最少，可能与当地土质有关，说明当地土壤肥力较高[10]。另外，其前茬作物分别是白菜、大葱等，可能这些蔬菜的根系分泌物抑制了土壤中真菌生长，有利于抑制真菌病害发生[11]。 2.2 土壤中真菌的种类
各大棚真菌种类不完全一致，共6个属（表2）。其中，青霉（Penicillum）、曲霉（Aspergillus）、镰刀菌（Fusarium）这3个属是常见土壤微生物，数量较多，占真菌总数的91.95%。青霉（Penicillum）是其中的優势种，占真菌总数的41.09%。
3 结论与讨论
3.1 微生物总量与病害发生的关系
蔬菜大棚土壤这一特殊生态环境的微生物群落主要由真菌、放线菌和细菌三大类别组成。据调查，各个不同蔬菜产业园区大棚土壤微生物总数量的高低与大棚病害的发生程度并不成正相关，微生物数量高、使用年限长的大棚病害发生并不一定比微生物含量低、使用年限短的大棚重。这说明病害发生轻或重的关键在于土壤微生物结构是否合理，而不在于数量的多少[3]。
3.2 微生物种类与种植作物及土质的关系
王爷府冷棚蔬菜种植区和榆树湾蔬菜园区大棚真菌数量最少，它们的前茬作物分别是白菜、大葱等小型蔬菜，可能这些蔬菜的根系分泌物抑制了土壤中真菌的生长，有利于抑制真菌病害的发生[11]。另有报道称土壤真菌较少，说明当地土壤肥力较高[10]。大棚真菌数量较少是否与种植作物及土质相关，还需要进一步探究。另外，榆树湾设施蔬菜园区和红山区设施农业产业园区大棚放线菌数量较多，可能是这些大棚前茬作物均为白菜类，有利于放线菌的繁殖和积累，这一结果也需要进一步研究。
4 参考文献
[1] 王燕春，周艳芳，徐佳，等.赤峰市设施蔬菜病虫害问题现状与对策[J].内蒙古农业科技，2013（1）：78-79.
[2] 韩雪，吴凤芝，潘凯.根系分泌物与土传病害关系之研究综述[J].中国农学通报，2006，22（2）：316-318.
[3] 姚圣梅，杨晓红，郑雪虹，等.蔬菜大棚土壤微生物种类及数量的初步研究[J].华中农业大学学报，1997，16（4）：347-350.
[4] 李阜棣，喻子牛，何绍江.农业微生物学实验技术[M].北京：中国农业出版，1996：305-307.
[5] 单鸿宾，梁智，王纯利.棉田连作对土壤微生物及酶活性的影响[J].中国农业科技导报，2009，11（1）：113-117.
[6] 郑亚萍，王才斌，黄顺之，等.花生连作障碍及其缓解措施研究进展[J].中国油料作物学报，2008，30（3）：384-388.
[7] 邹莉，袁晓颖，李玲.连作对大豆根部土壤微生物的影响研究[J].微生物学杂志，2005，25（2）：27-30.
[8] 刘金波，许艳丽.我国连作大豆土壤微生物研究现状[J].中国油料作物学报，2008，30（1）：132-136.
[9] 胡元森，刘亚峰，吴坤.黄瓜连作土壤微生物区系变化研究[J].土壤通报，2006，37（1）：126-129.
[10] 王超，吴凡，刘训理.不同肥力条件下烟草根际微生物的初步研究[J].中国烟草科学，2005（2）：12-14.
[11] 张丽红，符建平，高丽红，等.不同蔬菜轮作对日光温室土壤微生物的影响[J].中国农学通报，2010，26（1）：140-144.
关键词 蔬菜大棚；土壤微生物；种类；数量；内蒙古赤峰
中图分类号 S154.3 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2017）16-0163-01
Abstract To study the differences of soil microorganism in different vegetable greenhouses，the species and quantity of soil microorganism of eight vegetable greenhouse in different areas of Chifeng City were detailed in this paper.The bacterium，fungi and actinomycetes of soil were cultivated，counted in 2，4，and 6 days after cultivated，and the fungi were identified in microscope.The results showed that the Penicillum，Aspergillus and Fusarium were the most，91.95% in fungi.The species and quantity of soil microorganism were related with the used time of greenhouse，species of crop and continuous cropping.The quantity of soil microorganism of long used greenhouse was more，continuous cropping greenhouse was less.
Key words vegetable greenhouse；soil microorganism；species；quantity；Chifeng Inner Mongolia
赤峰市地处内蒙古中东部，设施蔬菜面积达6.67万hm2以上[1]。随着设施蔬菜生产的发展和蔬菜大棚的特殊环境，蔬菜病害成为影响大棚蔬菜产量和品质的重要因素。尤其是随着连作年限的增加，土壤中病原微生物积累，导致近年来各类蔬菜的根腐病、疫病等土传病害日益严重[2]，而土壤是微生物存活和传播的重要途径。因此，研究蔬菜大棚这一特殊生态环境的土壤微生物区系，了解其种群特点，对于促进大棚生产有重要意义[3]。随着蔬菜大棚种植年限的增长，各类蔬菜的病害种类越来越多，而且由于赤峰市各个蔬菜主产区每年种植蔬菜种类不同，导致病害千变万化。本研究探索赤峰市不同地区蔬菜大棚土壤微生物群落的组成情况，旨在为进一步防治蔬菜病害研究提供依据。
1 材料与方法
1.1 土壤样本采集
2016年8月，在赤峰市当铺地设施蔬菜园区、全家梁万亩蔬菜园区、王爷府冷棚蔬菜种植区、榆树湾蔬菜园区、大城子蔬菜产业园区、小城子蔬菜产业园区、元宝山蔬菜种植区、红山区设施农业产业园区的8个蔬菜大棚集中区采集土壤样本，取0～20 cm表土。样品分别用代号1～8表示。
1.2 培养基制备
细菌培养基（LB培养基）：酵母膏5 g，蛋白胨10 g，氯化钠10 g，琼脂10～20 g，蒸馏水1 000 mL。
真菌培养基（马铃薯葡萄糖琼脂培养基，PDA）：马铃薯200 g，葡萄糖20 g，琼脂17～20 g，蒸馏水1 000 mL。
放线菌培养基（高氏一号培养基）：淀粉20 g，硝酸钾1 g，氯化钠0.5 g，磷酸氢二钾0.5 g，七水合硫酸镁0.5 g，七水合硫酸亚铁0.01 g，琼脂 15 g，蒸馏水1 000 mL。
1.3 土壤微生物分离、培养和鉴定
采用稀释平板法[4]进行土壤微生物分离。从每个大棚土壤样本中取出50 g，加入200 mL无菌水，搅拌均匀，将土壤配成25%土壤悬浮液。放于摇床上振荡30 min，然后静置5 min，吸取1 mL上清液于离心管中，加入9 mL无菌水，将土壤稀释成10-1浓度，依次将土壤稀释成10-2、10-3、10-4浓度。真菌选择10-1浓度涂板，细菌选择10-4浓度涂板，放线菌选择10-3浓度涂板，各取120 mL土壤溶液进行涂板，每菌涂板3个。放于28 ℃培养箱中恒温培养。细菌、真菌、放线菌分别于培养2、4、6 d后开始统计菌落数，对真菌的每个菌落进行镜检，在显微镜下观察菌丝、孢子梗、孢子等结构的形态，根据所观察的真菌形态特征作分类检索，确定真菌属名。
2 结果与分析
2.1 土壤微生物的数量与组成
从表1可知，赤峰市8个蔬菜大棚集中区1 g大棚土壤含微生物總量平均为1.34×108 cfu，其中细菌1.24×108 cfu，放线菌9.65×106 cfu，真菌3.40×104 cfu。全家梁万亩蔬菜园区大棚微生物总数最低，其中细菌数量最低，可能是该大棚常年种植番茄，几乎不倒茬，单一种植方式导致微生物数量较低[5-9]。榆树湾设施蔬菜园区和红山区设施农业产业园区大棚土壤放线菌数量较多，可能是这2个大棚前茬作物均为白菜类，其根系分泌物有利于放线菌繁殖和积累。王爷府冷棚蔬菜种植区和榆树湾蔬菜园区大棚真菌数量最少，可能与当地土质有关，说明当地土壤肥力较高[10]。另外，其前茬作物分别是白菜、大葱等，可能这些蔬菜的根系分泌物抑制了土壤中真菌生长，有利于抑制真菌病害发生[11]。 2.2 土壤中真菌的种类
各大棚真菌种类不完全一致，共6个属（表2）。其中，青霉（Penicillum）、曲霉（Aspergillus）、镰刀菌（Fusarium）这3个属是常见土壤微生物，数量较多，占真菌总数的91.95%。青霉（Penicillum）是其中的優势种，占真菌总数的41.09%。
3 结论与讨论
3.1 微生物总量与病害发生的关系
蔬菜大棚土壤这一特殊生态环境的微生物群落主要由真菌、放线菌和细菌三大类别组成。据调查，各个不同蔬菜产业园区大棚土壤微生物总数量的高低与大棚病害的发生程度并不成正相关，微生物数量高、使用年限长的大棚病害发生并不一定比微生物含量低、使用年限短的大棚重。这说明病害发生轻或重的关键在于土壤微生物结构是否合理，而不在于数量的多少[3]。
3.2 微生物种类与种植作物及土质的关系
王爷府冷棚蔬菜种植区和榆树湾蔬菜园区大棚真菌数量最少，它们的前茬作物分别是白菜、大葱等小型蔬菜，可能这些蔬菜的根系分泌物抑制了土壤中真菌的生长，有利于抑制真菌病害的发生[11]。另有报道称土壤真菌较少，说明当地土壤肥力较高[10]。大棚真菌数量较少是否与种植作物及土质相关，还需要进一步探究。另外，榆树湾设施蔬菜园区和红山区设施农业产业园区大棚放线菌数量较多，可能是这些大棚前茬作物均为白菜类，有利于放线菌的繁殖和积累，这一结果也需要进一步研究。
4 参考文献
[1] 王燕春，周艳芳，徐佳，等.赤峰市设施蔬菜病虫害问题现状与对策[J].内蒙古农业科技，2013（1）：78-79.
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[4] 李阜棣，喻子牛，何绍江.农业微生物学实验技术[M].北京：中国农业出版，1996：305-307.
[5] 单鸿宾，梁智，王纯利.棉田连作对土壤微生物及酶活性的影响[J].中国农业科技导报，2009，11（1）：113-117.
[6] 郑亚萍，王才斌，黄顺之，等.花生连作障碍及其缓解措施研究进展[J].中国油料作物学报，2008，30（3）：384-388.
[7] 邹莉，袁晓颖，李玲.连作对大豆根部土壤微生物的影响研究[J].微生物学杂志，2005，25（2）：27-30.
[8] 刘金波，许艳丽.我国连作大豆土壤微生物研究现状[J].中国油料作物学报，2008，30（1）：132-136.
[9] 胡元森，刘亚峰，吴坤.黄瓜连作土壤微生物区系变化研究[J].土壤通报，2006，37（1）：126-129.
[10] 王超，吴凡，刘训理.不同肥力条件下烟草根际微生物的初步研究[J].中国烟草科学，2005（2）：12-14.
[11] 张丽红，符建平，高丽红，等.不同蔬菜轮作对日光温室土壤微生物的影响[J].中国农学通报，2010，26（1）：140-144.