【摘 要】
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以大肠杆菌-双叉双歧杆菌的穿梭质粒pHJ为基础,插入从Lactococcus lactis总DNA中用PCR方法扩增得到的报告基因乳酸脱氢酶基因(ldh),构建了双叉双歧杆菌的表达质粒pHJ-LDH,并
【机 构】
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复旦大学,生命科学学院,生物化学系,上海,200433
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以大肠杆菌-双叉双歧杆菌的穿梭质粒pHJ为基础,插入从Lactococcus lactis总DNA中用PCR方法扩增得到的报告基因乳酸脱氢酶基因(ldh),构建了双叉双歧杆菌的表达质粒pHJ-LDH,并采用电转化法导入双叉双歧杆菌进行了表达研究. 对双叉双歧杆菌总蛋白的SDS-PAGE分析结果表明,ldh报告基因的表达产物形成了明显的条带,Western-blotting结果确认了该条带为ldh基因的产物. LDH的酶活性定量测定结果表明,重组双叉双歧杆菌的蛋白粗抽提液中LDH的比活性为 5.5 U/mg,菌中LDH的表达量约为2 mg/L. 此工作为今后双叉双歧杆菌的基因工程奠定了基础.
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