禽致病性大肠杆菌cOmpT单克隆抗体的研制及其识别抗原表位的鉴定

• 作 者: 薛菲 杨梓纯 许炎辉 王娅玲 喻婷 樊毛迪 刘娟华 高崧 刘
• 机 构: 扬州大学兽医学院
• 出 处: 畜牧兽医学报
• 发表日期: 2020年12期
• 关键词: 禽致病性大肠杆菌 cOmpT 单克隆抗体 抗原表位 APEC cOmpT monoclonal antibody antigenic epitope
• 基金项目: 国家自然科学基金(31972711,31672553,31602059),国家重点研发计划(2017YFD0500705,2017YFD0500203),扬州大学大学生创新创业训练计划项目,江苏高校优势学科建设工程资助项目(PAPD)

旨在制备禽致病性大肠杆菌(APEC)染色体编码外膜蛋白(cOmpT)的特异性单克隆抗体,本研究利用实验室已构建的APEC cOmpT重组表达质粒pET-28a-c ompT,经IPTG诱导表达后,获得以包涵体形式存在的约36 ku的重组蛋白cOmpT,利用尿素浓度梯度透析复性获得纯化蛋白cOmpT,并以此免疫BALB/c小鼠。建立间接ELISA检测方法,最适抗原包被浓度为0.625μg·mL-1,最适血清稀释度为1∶6400。4次免疫后取小鼠脾进行细胞融合,采用有限稀释法多轮筛选后得到3株能稳定