重组质粒AHA1的构建和表达及对HeLa细胞周期的影响

• 作 者: 蒋智文 郑慧玲 陈维春 刘新光
• 机 构: 广东医学院衰老研究所,广东省医学分子诊断重点实验室,广东医学院生物化学与分子生物学研究所
• 出 处: 国际检验医学杂志
• 发表日期: 2013年8期
• 关键词: HELA细胞 免疫印迹法 细胞周期 Hela cells immunoblotting cell cycle
• 基金项目: 国家自然科学基金资助项目（30672205、30871440、30971620、81170327）, 广东省自然科学基金资助项目（8452402301001450）, 广东省高等学校自然科学研究重点项目（06Z015）, 广东医学院科技创新基金资助项目（STIF201102）, 广东医学院青年基金资助项目（Q2010009）

目的构建AHA1的真核表达质粒,并在HeLa细胞中进行表达,然后检测过表达的AHA1重组蛋白对HeLa细胞周期的影响。方法提取HeLa细胞中总RNA,逆转录成cDNA后,设计引物扩增AHA1基因的编码序列后构建到pCMV-HA真核表达载体中,转染HeLa细胞后使用HA标签抗体通过免疫印迹检测AHA1融合蛋白在细胞中的表达,最后分别使用流式细胞仪和CCK-8方法检测HeLa细胞的周期和增殖的变化。结果 pCMV-HA-AHA1重组质粒经PCR和DNA限制性内切酶酶切鉴定,最后通过DNA测序并经序列相似性比对