【摘 要】
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目的 探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)沉默对人端粒酶逆转录酶(hTERT)的抑制作用,以及其与肺癌放疗敏感性的关系.方法 建立稳定转染细胞系(H-1299)和HMGB1沉默(H-1299-shHMGB1)
【机 构】
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北部战区总医院 放射治疗科,辽宁 沈阳110016;北部战区总医院 妇产科,辽宁 沈阳110016
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目的 探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)沉默对人端粒酶逆转录酶(hTERT)的抑制作用,以及其与肺癌放疗敏感性的关系.方法 建立稳定转染细胞系(H-1299)和HMGB1沉默(H-1299-shHMGB1)细胞系,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测HMGB1 mRNA的表达.根据处理方式不同将细胞分为对照组(无X射线照射,转染空白质粒),HMGB1 KO组(转染HMGB1-shRNA,敲除HMGB1),KO+5 Gy组(转染HMGB1-shRNA,敲除HMGB1,照射剂量5 Gy),KO+10 Gy组(转染HMGB1-shRNA,敲除HMGB1,照射剂量10 Gy).应用噻唑蓝(MTT)和克隆形成实验分析HMGB1对肺癌细胞H-1299增殖和放射敏感性的影响.采用划痕损伤实验、Transwell实验和流式细胞仪检测HMGB1对放射诱导的肿瘤细胞迁移、侵袭、细胞周期和凋亡的影响.通过蛋白免疫印迹法分析HMGB1沉默对hTERT表达的影响.结果 与正常肺泡上皮细胞BEAS-2B比较,HMGB1在肺癌细胞H-1299中表达显著上调(P<0.05).10 Gy放疗48、96 h后,HMGB1均较对照组显著降低(P<0.05).MTT与细胞克隆形成实验结果 显示,HMGB1沉默后,随着放疗剂量增加,H-1299细胞活力显著降低(P<0.05).划痕实验结果 显示,HMGB1沉默后,随着放疗剂量增加,H-1299细胞迁移所受影响越明显(P<0.05).Transwell实验结果 显示,HMGB1沉默后,随着放疗剂量增加,H-1299细胞侵袭能力显著降低(P<0.05).HMGB1沉默后,H-1299细胞G1期减少,G2期增加;给予放疗后,细胞周期明显阻滞,G1期减少及G2期增加程度更明显.HMGB1沉默后,随着放疗剂量增加,H-1299细胞凋亡率明显增加(P<0.05).HMGB1沉默导致hTERT、RFPL3、CBP、TRF1和TRF2蛋白表达均有不同程度的降低,而给予放疗后,这些蛋白的表达均显著降低(P<0.05).结论 HMGB1下调破坏人肺癌细胞的端粒稳态,下调hTERT蛋白表达,增强放射敏感性,HMGB1和hTERT可能是肺癌放射治疗疗效预测的潜在靶点.
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