微小RNA-15b在腹膜间皮细胞转分化中的作用与机制

来源 :中华肾脏病杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ciyoyo23
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目的

探讨微小RNA-15b(microRNA-15b,miR-15b)对人腹膜间皮细胞向上皮间充质转分化(EMT)的调节作用及可能的分子机制。

方法

使用138 mmol/L高糖溶液刺激人腹膜间皮细胞株(HMrSV5)24 h,观察高糖溶液对HMrSV5细胞miR-15b表达的影响;转染miR-15b模拟物(miR-15b mimic)使HMrSV5中miR-15b过表达或转染miR-15b抑制剂抑制HMrSV5中miR-15b的表达,再给予138 mmol/L高糖溶液刺激24 h,采用实时荧光定量PCR、Western印迹等方法,观察过表达miR-15b或抑制miR-15b表达对高糖诱导的HMrSV5细胞EMT相关蛋白和基因表达的影响。同时,观察调节miR-15b后,Smad7的mRNA和蛋白表达的改变。

结果

138 mmol/L高糖溶液可使HMrSV5中miR-15b表达明显升高,转染miR-15b模拟物后可明显降低高糖诱导的上皮标志物E-cadherin的表达,并增加高糖引起的间充质标志物Vimentin及纤维化标志物Fibronectin mRNA和蛋白的高表达(均P<0.05);而转染miR-15b抑制剂则结果相反。同时,转染miR-15b mimic可明显抑制高糖诱导的Smad7 mRNA及蛋白水平的上调(P<0.05),而转染miR-15b抑制剂可明显增加高糖诱导的Smad7 mRNA及蛋白水平的上调(P<0.05)。

结论

miR-15b在高糖刺激腹膜间皮细胞HMrSV5转分化过程中上调,其可能通过调节TGF-β/Smad通路影响腹膜间皮细胞-上皮间充质转分化进程。miR-15b可能成为防治腹透相关性腹膜纤维化的新靶点。

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