金属内肽酶OMA1在脂多糖诱导的急性肾损伤中的作用

• 作 者: 肖潇 罗振钊 孔曼 卢忠心
• 机 构: 430030 武汉，华中科技大学同济医学院附属武汉中心医院检验医学科,430030 武汉，华中科技大学同济医学院附属武汉中心医院检验医学科,430030 武汉，华中科技大学同济医学院附属武汉中心医院检
• 出 处: 中华肾脏病杂志
• 发表日期: 2017年33期
• 关键词: 细胞凋亡 线粒体 线粒体蛋白质类 急性肾损伤

目的

探讨金属内肽酶OMA1对脂多糖（LPS）诱导的肾小管上皮细胞线粒体碎裂和细胞凋亡的影响。

方法

采用腹腔注射LPS的方法建立小鼠急性肾损伤模型，小鼠被分为野生型（WT）组和OMA1基因敲除型（OMA1 KO）组。检测小鼠Scr和BUN鉴定小鼠AKI模型成功与否。用TUNEL染色和半胱天冬酶3（Caspase 3）活性检测的方法判断肾脏组织中肾小管细胞凋亡改变。体外实验中，用OMA1 shRNA沉默人肾近曲小管细胞（HK2）OMA1基因，5 μg/ml LPS处理细胞，DAPI染色和荧光分光光度计法检测细胞凋亡。通过共转染OMA1 shRNA和mito-green质粒观测OMA1对细胞线粒体形态的影响，Western印迹法检测Cytochrome C释放和OMA1基因沉默效果。

结果

LPS诱导后WT组Scr [（97.2±26.5）μmol/L比（53.0±17.7）μmol/L]和BUN[（43.3±13.7）mmol/L比（29.7±7.7）mmol/L]均高于OMA1 KO组（均P<0.05），且WT组小鼠肾小管细胞凋亡严重程度大于OMA1 KO组[（75.4± 26.1）个/mm²比（38.3± 14.4）个/mm²，P<0.05]。转染OMA1 shRNA后抑制了HK2细胞内46%的OMA1蛋白表达（P<0.05），与对照组相比，LPS诱导后的OMA1 shRNA组HK2细胞线粒体碎裂减少[（29.8±10.9）%比（43.2±6.8）%，P<0.05]；Cytochrome C的释放减少[（37.0±12.3）%比（76.0±26.2）%，P<0.05]；凋亡细胞个数减少[（13.2±3.9）%比（25.0±7.1）%，P<0.01）]；细胞内Caspase活性降低[（8.9 ± 2.6）U比（18.6 ± 4.3）U，P<0.05]。

结论

沉默OMA1基因可以抑制LPS诱导的肾小管细胞线粒体碎裂和Cytochrome C的释放，减少细胞凋亡和缓解急性肾损伤。