黄芩苷铝胁迫下产肠毒素大肠杆菌内参基因的筛选

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[背景]产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)是导致仔猪腹泻的主要致病菌之一,黄芩苷铝对ETEC诱导的仔猪腹泻具有良好的治疗效果,但作用机制尚不明了.[目的]筛选出黄芩苷铝胁迫下ETEC中表达水平最为稳定的内参基因.[方法]采用qPCR技术测定了 12个内参基因 16SrRNA、mdh、recA、gapA、gyrA、gyrB、rpoA、rpoB、mdoG、dnaG、secA 和 fusA 在不同浓度(250、500和1 000 μg/mL)黄芩苷铝胁迫下培养不同时间后(4.5 h和6 h)的表达水平,并采用比较Ct值法、geNorm、BestKeeper和NormFinder软件4种方法对12个候选内参基因的表达稳定性进行评估.[结果]rpoA表达丰度适中,并在多个分析方法中表达最稳定.[结论]确定了 rpoA为ETEC qPCR的最佳内参基因,此研究为后续利用qPCR法研究黄芩苷铝胁迫ETEC后目的基因功能的表达奠定了基础.
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