雌激素受体α磷酸化位点突变体T224A和S559A的构建及其转录激活活性检测

• 作 者: 陈伟 周鹏宇 朱永杰 马胜利 曹叶 张萍萍 何湘 魏从文 钟
• 机 构: 广西医科大学附属肿瘤医院肝胆外科,军事医学科学院生物工程研究所,安徽大学健康科学院,吉林大学分子酶学工程实验室,济南军区总医院实验检验科
• 出 处: 生物技术通讯
• 发表日期: 2015年6期
• 关键词: 雌激素受体Α 磷酸化 突变体 雌激素 转录激活活性 estrogen receptor α phosphorylation mutant estrogen

目的：构建雌激素受体α（ERα）T224A和S559A磷酸化位点突变体载体,在HEK293T细胞中检测其表达及突变体生物活性的改变。方法：以pc DNA3-Flag-ERα为模板,通过重组PCR技术扩增目的基因片段并突变碱基,插入pc DNA3-Flag载体;将构建的质粒转染HEK293T细胞进行瞬时表达,通过Western印迹检测融合蛋白的表达,采用萤光素酶报告基因方法检测ERα突变体的活性改变。结果：T224A和S559A磷酸化位点突变体在HEK293T细胞中得到表达,相对分子质量为66×1