人自噬相关蛋白ATG5的原核表达及纯化

• 作 者: 晋帅 洪甜 闫志风 马永富 禇健 易绍琼 徐小洁 叶棋浓 刘
• 机 构: 解放军总医院,军事医学科学院生物工程研究所
• 出 处: 生物技术通讯
• 发表日期: 2016年2期
• 关键词: 人自噬相关蛋白ATG5 原核表达 纯化 自噬 human autophagy related protein 5 prokaryotic expression
• 基金项目: 国家自然科学基金（81573026,81502264,81472589,31100604）, 北京市自然科学基金（7132155）, 北京市科技新星计划（Z141102001814055）, 军事医学科学院创新基金转化医学项目（ZHYX003）

目的：原核表达纯化带His标签的自噬相关蛋白ATG5。方法：利用PCR技术从人乳腺文库中扩增出人ATG5基因的编码序列,插入载体p ET-28a（＋）中得到重组质粒,经Bam HⅠ和XhoⅠ双酶切鉴定后转化大肠杆菌Ros-sate进行小量诱导,挑选出可以诱导His-ATG5蛋白的菌液进行融合蛋白的纯化,通过Western印迹和SDS-PAGE检测融合蛋白的纯化效果。结果：用PCR技术从人乳腺文库中扩增得到约828 bp的目的片段,插入载体p ET-28a（＋）构建出His-ATG5重组质粒并经酶切及测序验