加工马铃薯Atlantic无标记基因遗传转化体系建立

来源 :分子植物育种 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chunling329
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本研究以加工型专用品种Atlantic为实验材料,分别对影响其遗传转化的外植体、激素、预培养、菌液浓度、侵染及共培养等因素进行优化,建立了农杆菌介导的无标记基因高效转化体系,初步获得了转基因植株.研究结果表明,叶片和茎段均可作为马铃薯品种Atlantic的受体材料,转化过程中以预培养2~3 d后用OD600=0.5的菌液侵染10~15 min,在MSG Ⅰ(添加有5 mg/L NAA和1.0 mg/L 6-BA)培养基上共培养2~3d后,转入含有250 mg/L的MSGⅡ(0.02 mg/L GA3和2.0 g/L ZT)的培养基上诱导生芽的遗传转化效率最高,其愈伤诱导率可达83.34%,芽分化率可达48.3%.通过该转化体系将抗马铃薯PVY病毒的基因导入马铃薯,获得无标记基因的转化植株,经PCR检测,初步确定已经将外源目的基因导入了马铃薯基因组中.“,”Based on the special potato cultivar Atlantic as test materials,we optimized the conditions which affected the genetic transformation of potato through analysis on the factors of the type of explants,hormone combination,pre-culture time,infection time,concentration of agrobacterium tumefaciens,co-culture time.The results showed that both leaf and stem were suitable for explants.In the process of transformation,pre-cultured for 2~3 d before infection of bacterial fluid (OD600=0.5,10~ 15 min) in MSG Ⅰ (adding 5 mg/L NAA and 1.0 mg/L 6-BA) were co-cultured with 2~3 d medium containing 250 mg/L,to MSG Ⅱ (0.02 mg/L GA3 and 2.0 mg/L ZT) training base on genetic transformation efficiency of induced buds most high,yielded the highest transformation efficiency with 95% of callus induction and 20% of differentiation.The gene resistant to potato PVY was introduced into potato through the above transformation system.PCR analysis to the transformants manifested that the target gene was integrated into the potato genome.
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