人巨细胞病毒包膜糖蛋白gB／AD-1片段的基因克隆和原核表达

• 作 者: 刘兰军 何太平 杨春 雍雪飞 何敏 葛永红
• 机 构: 成都蓉生药业有限责任公司抗体开发研究室
• 出 处: 中国生物制品学杂志
• 发表日期: 2006年6期
• 关键词: 人巨细胞病毒 包膜糖蛋白 抗原决定簇 Human cytomegalovirus Glycoprotein Antigenic domain

目的 克隆人巨细胞病毒包膜糖蛋白gB／AD-1片段并构建其原核表达系统。方法 用PCR法从人巨细胞病毒AD169株基因组DNA中扩增gB／AD-1片段并克隆至pGEM-T载体，酶切后，亚克隆至表达载体pET-15b，构建重组表达质粒pET-15b／gB／AD-1，并转化大肠杆菌，IPTG诱导表达。表达产物经金属螯合层析一步纯化，并用Western blot鉴定。结果gB／AD-1蛋白表达量达到35％。表达产物经纯化后，纯度大于95％。经Western blot检测，表达产物与CMV阳性人血清发生特异性反应