制备3－{ 4－[ 2－羟基－ (1－甲基乙胺基) 丙氧基]苯基}丙酸十六醇酯 (PAC) 修饰的纳米粒，观察其对心肌细胞的靶向性及对心肌的保护作用。
方法(1)将HL－1心肌细胞按随机数字表法分成花青素Cy3标记的非靶向小干扰RNA(Cy3－siNC)组和针对NF－κB－p65基因设计的花青素Cy3标记的小干扰RNA(Cy3－si435)组，每组3孔。Cy3－siNC组细胞转染Cy3－siNC，Cy3－si435组细胞转染Cy3－si435。转染24 h，实时荧光定量PCR检测细胞NF－κB－p65 mRNA的表达。(2)采用复乳溶剂挥发法制备PAC修饰且载有Cy3－siNC(Cy3－siNC－PAC)的纳米粒和PAC修饰且载有Cy3－si435(Cy3－si435－PAC)的纳米粒。扫描电镜观察Cy3－si435－PAC纳米粒的形态，纳米粒度及zeta电位仪检测Cy3－si435－PAC纳米粒的粒径和电势，紫外分光光度计测定Cy3－si435－PAC纳米粒的包封率、载药量，透析法测定Cy3－si435－PAC纳米粒的Cy3－si435释放量。(3)另取HL－1细胞，按随机数字表法分成4组，每组9孔。阴性对照组加入5 μL PBS；25、50、100 mg/mL Cy3－si435－PAC纳米粒组分别加入5 μL 25、50、100 mg/mL的Cy3－si435－PAC纳米粒。分别于转染6、12、24 h时，每组各取3孔，噻唑蓝法检测细胞的增殖活性。(4)另取HL－1细胞，培养24 h后加入100 μL Cy3－si435－PAC纳米粒。分别于转染0、4、8、12、24 h时各取3孔细胞，流式细胞仪检测摄取Cy3－si435－PAC纳米粒的细胞百分比。(5)另取HL－1细胞，按随机数字表法将细胞分成2组，每组3孔。Cy3－siNC－PAC组加入100 μL Cy3－siNC－PAC纳米粒，Cy3－si435－PAC组加入100 μL Cy3－si435－PAC纳米粒。转染24 h，实时荧光定量PCR检测细胞NF－κB－p65 mRNA的表达。(6)取6只雄性C57BL/6J小鼠，按随机数字表法分为2组，每组3只。Cy3－siNC－LPS组和Cy3－si435－LPS组小鼠尾静脉分别注射500 μL Cy3－siNC－PAC纳米粒和Cy3－si435－PAC纳米粒(50 mg/mL)，注射后24 h，再分别腹腔注射LPS(10 mg/kg)，诱导心肌损伤。伤后24 h，小动物成像仪检测纳米粒在小鼠体内的分布情况。(7)另取9只雄性C57BL/6J小鼠，按随机数字表法分为3组，每组3只。Cy3－siNC－生理盐水(NS)组和Cy3－siNC－LPS组小鼠尾静脉注射500 μL 50 mg/mL的Cy3－siNC－PAC纳米粒，Cy3－si435－LPS组小鼠注射500 μL 50 mg/mL的Cy3－si435－PAC纳米粒。注射后24 h，Cy3－siNC－NS组小鼠腹腔注射NS；Cy3－siNC－LPS组和Cy3－si435－LPS组小鼠腹腔注射10 mg/kg LPS，诱导心肌损伤。伤后24 h，取各组小鼠心肌组织，HE染色观察心肌病理变化。对数据行t检验、单因素方差分析。
结果(1)Cy3－si435组细胞NF－κB－p65 mRNA表达量为0.183±0.004，明显低于Cy3－siNC组的1.003±0.092(t＝15.46，P<0.01)。(2)制备的Cy3－si435－PAC纳米粒形态良好，粒径大小为146.0 nm，电势为－29.2 mV，包封率为(86.9±1.1)%，载药量为(25.4±0.9)%，Cy3－si435释放稳定。(3)转染6、12、24 h，4组细胞增殖活性总体比较，差异均无统计学意义(F值为0.129～2.512，P值均大于0.05)。(4)转染0、4、8、12、24 h时，摄取Cy3－si435－PAC纳米粒的细胞百分比分别为(0.79±0.06)%、(31.04±1.59)%、(51.64±2.67)%、(68.15±2.60)%、(83.68±4.67)%。(5)Cy3－si435－PAC组细胞NF－κB－p65 mRNA的表达量为0.286±0.015，明显低于Cy3－siNC－PAC组细胞的1.002±0.073(t＝16.62，P<0.01)。(6)伤后24 h，Cy3－siNC－LPS组和Cy3－si435－LPS组小鼠心肌细胞都能够观察到分布均匀的纳米粒。(7)Cy3－siNC－NS组小鼠心肌纤维结构致密，无炎性细胞浸润，胞质分布均匀；Cy3－siNC－LPS组小鼠心肌纤维结构疏松，炎性细胞浸润，胞质分布散乱；Cy3－si435－LPS组小鼠心肌纤维结构较致密，未见明显炎性细胞浸润，胞质分布均匀。
结论Cy3－si435－PAC纳米粒形态良好，粒径大小均一，电势分布正常，无细胞毒性；能够被HL－1细胞有效摄取并抑制细胞NF－κB－p65 mRNA的表达；能够有效靶向到小鼠心肌细胞并减少炎性细胞浸润，减轻LPS诱导的小鼠心肌损伤。