【摘 要】
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目的:观察同型半胱氨酸(Hcy)对外周血内皮祖细胞(EPCs)的影响.方法:密度梯度离心法获取外周血单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白包被的培养板,培养7 d后,收集贴壁细胞,加
【机 构】
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浙江大学医学院第一附属医院心内科暨心血管病研究所
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目的:观察同型半胱氨酸(Hcy)对外周血内皮祖细胞(EPCs)的影响.方法:密度梯度离心法获取外周血单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白包被的培养板,培养7 d后,收集贴壁细胞,加入不同浓度Hcy(10μmol/L、50μmol/L、100μmol/L和200μmol/L)干预一定时间(6 h、12 h、24 h和48 h).多波长激光共聚焦显微镜鉴定FITC-UEA-Ⅰ和DiI-acLDL双染色阳性细胞为正在分化的EPCs,流式细胞仪检测其表面标志进一步鉴定EPCs,倒置荧光显微镜下计数.采用MTT比色法、改良的Boyden小室、粘附能力测定实验和体外血管生成试剂盒分别观察EPCs的增殖能力、迁移能力、粘附能力和体外血管生成能力.结果:Hcy呈量效和时效地减少EPCs数量,200 μmol/LHcy作用24 h后EPCs数量明显少于对照组(35.7±6.7vs62.5±10.6,P＜0.01),并损害EPCs增殖(0.531±0.061vs0.328±0.055,P＜0.01)、迁移(26.3±6.4vs6.4±3.7,P＜0.01)、贴壁(33.1±8.1vs17.4±7.5,P＜0.01)、和体外血管生成(25.4±9.1vs10.4±4.7,P＜0.01).结论:Hcy不但减少EPCs数量并损害其功能.
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