【摘 要】
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考察重组精氨酸脱亚胺酶工程菌E.coli BL21/pET27b-rADI的遗传稳定性.在有抗生素(卡那霉素)选择压力的条件下,采用SB平板划线连续传代50代,每10代取样保藏菌种,并进行菌落形
【机 构】
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中国医药工业研究总院上海医药工业研究院,上海厚森医药科技有限公司
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考察重组精氨酸脱亚胺酶工程菌E.coli BL21/pET27b-rADI的遗传稳定性.在有抗生素(卡那霉素)选择压力的条件下,采用SB平板划线连续传代50代,每10代取样保藏菌种,并进行菌落形态、质粒稳定性、限制性内切酶酶切图谱、测序、蛋白表达量及重组蛋白活性检测.结果表明,10、20、30、40和50代工程菌的菌落形态及抗生素抗性与原始工程菌无显著差异,质粒的酶切图谱一致,各代质粒稳定,DNA测序未见基因突变或丢失;经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导后,原始及传50代工程菌的重组精氨酸脱亚胺酶表达水平和蛋白质活性无显著差异.
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