【摘 要】
：
为了解铁氧还蛋白NADP+氧化还原酶(FNR)在文心兰抵御软腐病过程中的作用,该研究采用RACE技术从文心兰\'小樱桃\'中克隆到一条OnFNR基因(登录号为KX461908),分析其序列特性和编码蛋白亚细胞定位情况,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析其在不同组织部位以及不同软腐病感病阶段的表达模式,构建OnFNR过表达载体并转化文心兰原球茎(PLBs),对转基因原球茎进行软腐病抗性评价.结果 显示:(1)文心兰OnFNR基因开放阅读框长为1080 bp,预测可编码含359个氨基酸、分子
【机 构】
：
福建农林大学园艺植物生物工程研究所,福州350002;福建农林大学园艺植物生物工程研究所,福州350002;福建省三明农业科学研究院,福建三明365000;福建农林大学园艺植物生物工程研究所,福州35
论文部分内容阅读
为了解铁氧还蛋白NADP+氧化还原酶(FNR)在文心兰抵御软腐病过程中的作用,该研究采用RACE技术从文心兰\'小樱桃\'中克隆到一条OnFNR基因(登录号为KX461908),分析其序列特性和编码蛋白亚细胞定位情况,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析其在不同组织部位以及不同软腐病感病阶段的表达模式,构建OnFNR过表达载体并转化文心兰原球茎(PLBs),对转基因原球茎进行软腐病抗性评价.结果 显示:(1)文心兰OnFNR基因开放阅读框长为1080 bp,预测可编码含359个氨基酸、分子量为40066.14 Da、等电点为8.72的碱性蛋白;OnFNR具有典型的FAD结合结构域和NADW结合结构域,定位于叶绿体.(2)多序列比对和进化树分析发现,OnFNR与其他植物LFNR聚为一类,并与小兰屿蝴蝶兰LFNR的相似度最高(89.1％).(3) qRT PCR结果显示,OnFNR在文心兰叶中的表达量最高,其次是假鳞茎与花,根中最低;文心兰植株接种软腐病病原菌1d后叶片和假鳞茎的OnFNR基因表达量呈现极显著下调,并且在5个感病阶段的表达量均低于健康植株.(4)成功构建过表达载体pCAMBIA1301-OnFNR,并经农杆菌EHA105侵染成功转入文心兰PLBs,获得过表达OnFNR转基因原球茎16个;在过表达OnFNR文心兰PLBs中,OnFNR与Fd基因表达均呈现极显著上调,尤其是Fd表达量上调至对照(非转基因PLBs)的3.67倍,且过表达OnFNR的PLBs在软腐病病原菌侵染第4天的存活率仍有48.88％,而对照的存活率只有6.66％.研究表明,文心兰OnFNR是一个定位于叶绿体的光合型铁氧还蛋白NADP+氧化还原酶,过表达OnFNR能够明显提高文心兰植株的抗病性,推测OnFNR在植物抵抗病毒以及ROS爆发中具有重要作用,且过表达OnFNR可能通过提高LET的电子传递效率,进而提高Fd的表达量达到促进MAPK通路信号传导的效果.
其他文献
目的 以人主动脉内皮细胞(HAEC)为研究对象,探讨敲减前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)对β甘油磷酸、地塞米松、L-抗坏血酸诱导内皮间质转化(EndoMT)的保护作用.方法 以(0、10、30、50) mmol/L β甘油磷酸联合100 nmol/L地塞米松和50μg/ml L-抗坏血酸诱导HAEC建立EndoMT模型.采用PCSK9的特异性小干扰RNA(si-PCSK9)转染HAEC,实时荧光定量PCR与Western blot法检测HAEC的PCSK9的mRNA和蛋白表达.将HAEC随机分为空白
针对信息传输过程中图像信息容易被窃取、篡改等恶意破坏的问题,构建一个新的超Chen混沌系统,并将其与二维Chebyshev-Sine混沌系统相结合,提出了一种新的图像加密算法.该算法首先对明文图像像素坐标位置进行Arnold变换,其次将超混沌序列应用于图像的扩散,最后运用二维Chebyshev-Sine混沌映射产生的混沌序列对扩散后的图像进行分块扩散与置乱,获得最终加密图像.对实验结果经多方面分析得出该算法的密钥空间大,且可以有效抵御多种恶意攻击,有足够的安全性.
目的 探讨脂肪酸结合蛋白5(FABP5)在肝癌缺氧诱导的血管生成中的作用及机制.方法 Huh7细胞进行常规培养及低氧培养;FABP5小干涉RNA(FABP5 siRNA)转染敲低Huh7细胞FABP5表达,反转录PCR检测FABP5 mRNA表达,Western blot法检测FABP5、血管内皮生长因子A(VEGFA)表达,ELISA检测Huh7细胞上清液VEGFA浓度;成管实验检测Huh7细胞上清液诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的成管能力.结果 低氧培养后,FABP5 mRNA以及FABP5及VE
目的 分析被检者血清中存在高效价IgG型抗A、抗D抗体的血型血清学检测结果及临床意义.方法 采用微柱凝胶法(MGT)对被检者及其丈夫进行ABO及RhD血型鉴定和不规则抗体筛选,对夫妇血型不合及抗体筛选阳性被检者血标本采用盐水法(NS)及间接抗人球蛋白法(IAT)进行IgG型抗A抗体效价测定和不规则抗体特异性鉴定.结果 被检者ABO血型为O型,Rh血型为ccdee,IgG型抗A抗体效价为1∶256、抗D抗体效价为1∶512.被检者丈夫ABO血型为A型,RhD血型为阳性,夫妇ABO及RhD血型不相合.结论 高
岩石分类有效提升地质风险评估的效率,为提高岩石粒度特征的识别精度,提出基于多尺度分组卷积ResNet34网络的岩石识别方法,在残差模块中添加多尺度分组卷积和空洞卷积,提升网络的特征表达能力.采用多尺度分组卷积特征提取的方式,将特征图按通道方向分为四部分,分别采用不同大小的卷积核进行并行运算和拼接,在更细粒度上提取岩石特征,同时减少了模型训练参数,进而采取空洞卷积增加感受野大小,提升岩石粒度识别精度.实验表明,该方法不仅有效提升了网络训练的收敛速度,而且在2021年第九届“泰迪杯”数据挖掘挑战赛七类岩石数据
2021年11月,国务院学位委员会下发了《关于下达 2020 年审核增列的博士、硕士学位授权点名单的通知(学位〔2021〕14 号)》,陕西科技大学化学、机械工程、食品科学与工程等 3 个学科成功获批一级学科博士学位授权点.截至目前,该校拥有一级学科博士学位授权点 7 个,一级学科硕士学位授权点 21 个,初步形成了优势突出、特色鲜明、结构合理、协调发展的学科体系.
目的 构建靶向金黄色葡萄球菌α溶血素(α-HL)的全人源重组抗体互补片段融合单链抗体(scFv-Fc),并进行表达及功能鉴定.方法 将前期筛选的抗金黄色葡萄球菌α-HL的全人源scFv538通过同源重组的方式插入pcDNA3.1-人IgG1 Fc质粒,构建成scFv538-Fc/pcDNA3.1重组载体,瞬时转染HEK293F细胞表达重组抗体蛋白并纯化.纯化后的scFv538-Fc抗体通过ELISA检测抗体与金黄色葡萄球菌的结合活性及特异性;CCK-8法检测A549细胞增殖活性以及抗兔红细胞溶血实验验证s
目的 通过导入人端粒酶逆转录酶(hTE RT)基因构建永生化人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC-hTERT),探索永生化HUVEC对汉滩病毒(HTNV)感染效率及细胞固有免疫调控的影响,评价HUVEC-hTERT作为研究HTNV细胞模型的潜能.方法 将hTERT基因克隆入慢病毒载体,构建pCDH-CMV-hTERT-EF1-puro质粒后包装慢病毒并感染HUVEC;嘌呤霉素筛选稳定表达hTERT基因的HUVEC命名为HUVEC-hTERT;利用显微镜观察和免疫荧光细胞化学染色法对HUVEC-hTERT的形态
目的 探索日本血吸虫多肽SJMHE1 (VPGGGTALLRCIPVLDTLSTKNED)对卵清蛋白诱导的哮喘小鼠2型辅助T(Th2)细胞、2型固有淋巴细胞(ILC2)反应的干预作用和机制.方法 将6～8周龄雄性BALB/c小鼠随机分成PBS组、卵清蛋白(OVA)组、OVA-PBS组和OVA-SJMHE1组.用OVA诱导小鼠支气管哮喘模型,HE染色观察小鼠肺组织病理改变,ELISA检测小鼠血清中OVA特异性IgE水平,用血细胞计数板计数肺泡灌洗液(BALF)中炎症细胞总数,流式细胞术检测小鼠BALF中的T
目的 探索热休克蛋白60(HSP60)蛋白表达变化影响膀胱癌细胞逃避自然杀伤(NK)细胞免疫监视的作用及机制.方法 免疫组织化学染色法检测HSP60在膀胱癌组织及癌旁组织中的表达,统计学分析HSP60在膀胱癌及癌旁组织的表达差异及HSP60表达水平与膀胱癌患者预后的相关性.利用腺病毒载体构建HSP60稳定干涉及过表达的膀胱癌细胞系并与NKL细胞共培养,ELISA及LDH释放实验检测NK细胞活化及杀伤能力的变化.Western blot法检测膀胱癌细胞乳酸脱氢酶A(LDHA)表达,试剂盒检测乳酸分泌.在HS