【摘 要】
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目的 构建靶向金黄色葡萄球菌α溶血素(α-HL)的全人源重组抗体互补片段融合单链抗体(scFv-Fc),并进行表达及功能鉴定.方法 将前期筛选的抗金黄色葡萄球菌α-HL的全人源scFv538通过同源重组的方式插入pcDNA3.1-人IgG1 Fc质粒,构建成scFv538-Fc/pcDNA3.1重组载体,瞬时转染HEK293F细胞表达重组抗体蛋白并纯化.纯化后的scFv538-Fc抗体通过ELISA检测抗体与金黄色葡萄球菌的结合活性及特异性;CCK-8法检测A549细胞增殖活性以及抗兔红细胞溶血实验验证s
【机 构】
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西南医科大学基础医学院免疫学教研室,四川泸州646000
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目的 构建靶向金黄色葡萄球菌α溶血素(α-HL)的全人源重组抗体互补片段融合单链抗体(scFv-Fc),并进行表达及功能鉴定.方法 将前期筛选的抗金黄色葡萄球菌α-HL的全人源scFv538通过同源重组的方式插入pcDNA3.1-人IgG1 Fc质粒,构建成scFv538-Fc/pcDNA3.1重组载体,瞬时转染HEK293F细胞表达重组抗体蛋白并纯化.纯化后的scFv538-Fc抗体通过ELISA检测抗体与金黄色葡萄球菌的结合活性及特异性;CCK-8法检测A549细胞增殖活性以及抗兔红细胞溶血实验验证scFv538-Fc抗体对金黄色葡萄球菌α-HL的中和作用.结果 成功构建了抗金黄色葡萄球菌α-HL的scFv-Fc抗体,HEK293F细胞表达的抗体蛋白相对分子质量(Mr)约为55000.表达纯化的scFv538-Fc能够特异性和金黄色葡萄球菌α-HL结合,并具备中和金黄色葡萄球菌α-HL的毒性作用,减轻α-HL对A549细胞的毒性作用和对兔红细胞的细胞裂解作用.结论 成功制备有效中和金黄色葡萄球菌α-HL的全人源重组scFv.
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