【摘 要】
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目的 在不同原核表达载体中表达人β2微球蛋白(β2-microglobulin,β2MG),并比较两种蛋白的活性.方法 将人β2MG基因分别插入原核表达载体pET-28a(+)和pET-32a(+)中,构建重组表达质粒pET-28a(+)-β2MG和pET-32a(+)-β2MG,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达.获得的两种β2MG融合蛋白菌液经离心、超声破碎处理后,分别取上清和沉淀进行SDS-PAGE分析,利用Ni柱亲和层析法纯化目的 蛋白,间接ELISA法检测两种融合蛋白的免疫学
【机 构】
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青岛中科爱博生物科技有限公司,山东青岛266400
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目的 在不同原核表达载体中表达人β2微球蛋白(β2-microglobulin,β2MG),并比较两种蛋白的活性.方法 将人β2MG基因分别插入原核表达载体pET-28a(+)和pET-32a(+)中,构建重组表达质粒pET-28a(+)-β2MG和pET-32a(+)-β2MG,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达.获得的两种β2MG融合蛋白菌液经离心、超声破碎处理后,分别取上清和沉淀进行SDS-PAGE分析,利用Ni柱亲和层析法纯化目的 蛋白,间接ELISA法检测两种融合蛋白的免疫学活性.结果 不同表达载体所表达的β2MG溶解性不同,pET-28a(+)-β2MG于37℃诱导表达的His-β2MG以包涵体形式表达,pET-32a(+)-β2MG于25℃诱导表达的Trx-His-β2MG以可溶性蛋白形式表达.纯化的两种融合蛋白纯度均可达95％以上,Trx-His-β2MG的免疫学活性显著高于His-β2MG,且优于对标抗原.结论 人β2MG在不同原核表达载体中的表达位置和活性均不同,可溶性表达的Trx-His-β2MG具有较高的免疫学活性,应用价值较大,为免疫诊断试剂的开发奠定了基础.
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