【摘 要】
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目的:用Red系统快速敲除痢疾杆菌asd基因.方法:本研究首先合成一对引物(每一条的5′端与asd基因同源,3′端与氯霉素抗性基因同源),并用来获得氯霉素抗性基因的PCR产物,然后电
【机 构】
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军事医学科学院生物工程研究所,北京,100071
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目的:用Red系统快速敲除痢疾杆菌asd基因.方法:本研究首先合成一对引物(每一条的5′端与asd基因同源,3′端与氯霉素抗性基因同源),并用来获得氯霉素抗性基因的PCR产物,然后电击转化至大肠杆菌DH5α和痢疾杆菌福氏2a 2457T中,在λRed重组系统的帮助下,通过氯霉素抗性基因两侧的asd基因序列在体内与asd基因发生同源重组,置换了DH5α和2457T基因组中的asd基因,最后又利用氯霉素抗性基因两端的FRT位点,通过FTP位点专一性重组将氯霉素抗性基因剔除.结果与结论:获得了asd基因被完全敲除且不带氯霉素抗性基因的大肠杆菌和痢疾杆菌,使Red系统在大肠杆菌以外微生物中的应用获得成功.
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