【摘 要】
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目的:探讨体外分离培养大鼠间充质干细胞(MSC)的方法,并对其进行表型鉴定及黏附分子测定.方法:采用全骨髓直接贴壁法获得原代大鼠骨髓MSC,差速贴壁结合消化控制法纯化细胞,Ⅰ
【机 构】
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山东农业大学动物科技学院,山东,泰安,271018山东大学医学院,山东,济南,250012;泰山医学院免疫学教研室,山东,泰安,271000;
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目的:探讨体外分离培养大鼠间充质干细胞(MSC)的方法,并对其进行表型鉴定及黏附分子测定.方法:采用全骨髓直接贴壁法获得原代大鼠骨髓MSC,差速贴壁结合消化控制法纯化细胞,Ⅰ型胶原作为细胞外基质扩增MSC;镜下观察细胞生物学形态及生长状态,流式细胞仪检测第4代MSC的细胞周期,免疫细胞化学方法对其进行表型鉴定与细胞黏附分子检测.结果:原代培养的MSC呈圆形、梭形、多角形等,24 h内即可见少量细胞体壁伸展,7～8 d左右可达90%融合,纯化扩增后的MSC呈均匀一致的长梭形,24 h内细胞已基本贴壁,传代周期为5 d左右.流式细胞术检测显示,第4代MSC约有80%处于G0/G1期.免疫细胞化学显示,MSC CD34、CD45表达阴性,CD29、CD105、CD166、VLA-4、P-selectin表达阳性.结论:本实验方法能很容易地获得大量高纯度的MSC,并表达一定的黏附分子,为MSC进一步临床应用打下了良好的基础.
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