【摘 要】
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利用番木瓜环斑病毒(PRSV)HC-Pro基因3′端824bp区段,通过OZ-LIC法构建了含有PDK内含子的发夹RNA编码结构,并选用pSP73和M-Jm109LacY分别作为宿主载体和宿主菌,构建了高效的
【机 构】
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海南大学农学院,海南师范大学生命科学学院,中国热带农业科学院热带生物技术研究所,分析测试中心,
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利用番木瓜环斑病毒(PRSV)HC-Pro基因3′端824bp区段,通过OZ-LIC法构建了含有PDK内含子的发夹RNA编码结构,并选用pSP73和M-Jm109LacY分别作为宿主载体和宿主菌,构建了高效的同源dsRNA原核表达工程菌M-Jm109LacY/pSP73-RNAi-H824,经IPTG诱导表达的dsRNA不被DNaseI和RNaseA降解,稳定性较好。采用喷洒dsRNA粗制品的方式对番木瓜植株进行保护性处理和治疗性处理,症状观察及ELISA、Real-time RT-PCR分析结果表明,保护性处理能有效诱发对番木瓜环斑病毒的抗性(发病率低,发病时间晚);治疗性处理(植株已接种PRSV 25d)能在处理初期引起番木瓜环斑病毒积累量发生短暂降低。
The coding region of hairpin RNA containing PDK intron was constructed by OZ-LIC method using the 3’-terminal 824bp region of papaya ring spot virus (PRSV) HC-Pro gene and pSP73 and M-Jm109LacY were selected as host vectors And host bacteria, an efficient homologous dsRNA prokaryotic expression strain M-Jm109LacY / pSP73-RNAi-H824 was constructed. The dsRNA induced by IPTG was not degraded by DNase I and RNase A, and the stability was good. Papaya plants were treated with protective and therapeutic treatments by spraying dsRNA crude product. Symptom observation and ELISA, real-time RT-PCR analysis showed that protective treatment could effectively induce resistance to papaya ringspot virus (Low incidence, late onset); curative treatment (PRSV plants have been inoculated with 25d) caused a brief decrease in the accumulation of papaya ringspot virus in the early stages of treatment.
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