探讨饱和氢盐水对大鼠原位肝移植术后急性肾损伤的影响及自噬在其中的作用。
方法健康成年雄性SD大鼠56只,8~10周龄,体重220~250 g,作为肝移植术的供体和受体。受体大鼠32只,采用随机数字表法分为4组(n=8):假手术组(S组):行开关腹操作,并游离相应血管;肝移植组(OLT组):建立大鼠原位肝移植模型,于无肝期前5 min下腔静脉注射生理盐水6 ml/kg;饱和氢盐水组(HS组):建立大鼠原位肝移植模型,并于无肝期前5 min下腔静脉注射饱和氢盐水6 ml/kg;自噬抑制剂氯喹组(CQ组):模型建立前1 h腹腔注射自噬抑制剂氯喹60 mg/kg,其它处理同HS组。于新肝期6 h时取血样4 ml,检测血清BUN及Cr的浓度。取血结束后,取左肾组织,采用硫代巴比妥酸法测定MDA含量,黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性;观察肾组织病理学结果,行肾小管损伤评分;采用TUNEL染色法检测凋亡指数(AI);采用Western blot法测定肾组织磷酸化p53(p-p53)、活化的caspase-3、细胞色素c(Cyt c)、微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)和Beclin-1的表达水平。
结果与S组比较,OLT组血清BUN和Cr浓度、肾组织MDA含量、AI和肾小管损伤评分升高,SOD活性降低,肾组织活化的caspase-3、Cyt c和LC3Ⅱ表达上调(P<0.05),p-p53表达水平差异无统计学意义(P>0.05);与OLT组比较,HS组血清BUN和Cr浓度、肾组织MDA含量、AI和肾小管损伤评分降低,SOD活性升高,活化的caspase-3和Cyt c表达下调,LC3Ⅱ、Beclin-1和p-p53表达上调(P<0.05);与HS组比较,CQ组血清BUN和Cr浓度、肾组织MDA含量、AI和肾小管损伤评分升高,SOD活性降低,活化的caspase-3和Cyt c表达上调,LC3Ⅱ和Beclin-1表达下调(P<0.05),p-p53表达差异无统计学意义(P>0.05)。
结论饱和氢盐水可减轻大鼠原位肝移植术后急性肾损伤,其机制与激活p53从而增强自噬水平,抑制细胞凋亡有关。