【摘 要】
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目的 克隆、表达和鉴定肝癌标志物高尔基体蛋白73 (GP73)基因序列(1028～1327 bp).方法 应用Biosun生物学软件分析GP73全序列,预测其抗原表位,将GP73蛋白基因克隆到表达载体PGE
【机 构】
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首都医科大学附属北京佑安医院北京市肝病研究所分子生物学室,100069北京,军事医学科学院基础医学研究所;
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目的 克隆、表达和鉴定肝癌标志物高尔基体蛋白73 (GP73)基因序列(1028～1327 bp).方法 应用Biosun生物学软件分析GP73全序列,预测其抗原表位,将GP73蛋白基因克隆到表达载体PGEX-4T-2上,构建重组表达质粒PGEX-4T-2/GP73,转化大肠杆菌BL21,异丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)诱导表达,利用GST亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用蛋白印迹分析技术(Western blot)和酶联免疫吸附测定方法(ELISA)检测其抗原性,并与商品化的GP73抗原进行比较.结果 本研究纯化的GP73蛋白在大肠杆菌中获得高效表达,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示其相对分子质量为37 kD,与预计大小一致.Western blot和ELISA实验证实,纯化的GP73蛋白具有良好的抗原性.结论 本研究成功克隆和表达了GP73序列,为制备抗体和肝癌诊断试剂的研发奠定了实验基础.
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