【摘 要】
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目的:研究兔髓核细胞的培养条件及生物学特性,并探讨独活寄生汤对体外培养兔髓核细胞凋亡的影响。方法:无菌环境下分离兔腰椎髓核组织,酶消化法消化,用DMEM/F12(1∶1)培养液
【机 构】
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浙江中医药大学附属第一医院; 温州医科大学附属第一医院; 浙江中医药大学; 浙江医院;
【基金项目】
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浙江省自然科学基金资助项目(No.Y13H270012)~~
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目的:研究兔髓核细胞的培养条件及生物学特性,并探讨独活寄生汤对体外培养兔髓核细胞凋亡的影响。方法:无菌环境下分离兔腰椎髓核组织,酶消化法消化,用DMEM/F12(1∶1)培养液培养。通过Ⅱ型胶原及集聚蛋白聚糖免疫组织化学检测进行细胞鉴定。髓核细胞传至第二代时开始药物干预。根据独活寄生汤药液不同浓度(100、200、400μg/m L)进行分组,0μg/m L为空白对照组。药物干预72h后,收集髓核细胞。RT-PCR法检测Fas、Fas L、Bcl-2、Bid、Bax、Caspase-8、Caspase-3 m RNA表达情况。结果:髓核细胞Ⅱ型胶原和集聚蛋白聚糖免疫组化染色为阳性。与空白对照组比较,独活寄生汤干预后能够下调Fas、Fasl、Bax、Bid、Caspase-3、Caspase-8 m RNA的表达(P<0.05),上调Bcl-2 m RNA的表达(P<0.05)。结论:体外环境下单层培养、酶消化法成功培养了兔髓核细胞。独活寄生汤通过抑制Fas介导的Ⅰ型和Ⅱ型凋亡通路的激活,从而抑制髓核细胞凋亡。
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