【摘 要】
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背景:脑缺血再灌注损伤后,细胞凋亡执行因子半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3酶原表达量及蛋白酶活性明显增加,针对其磷酸化与去磷酸化两种形式进行观察,了解其在脑缺血再灌注损伤时
【机 构】
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首都医科大学附属北京友谊医院肝病中心,首都医科大学生物化学与分子生物学系 北京市100050,北京市100054
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背景:脑缺血再灌注损伤后,细胞凋亡执行因子半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3酶原表达量及蛋白酶活性明显增加,针对其磷酸化与去磷酸化两种形式进行观察,了解其在脑缺血再灌注损伤时的变化情况。目的:观察脑缺血再灌注时小鼠脑海马区中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3酶原表达形式的变化。设计:随机对照实验。单位:首都医科大学生物化学与分子生物学系。地点和材料:实验于2003-06在首都医科大学附属北京朝阳医院高压氧科实验室进行。按随机数字将30只雌性SPF级C57BL/6N小鼠分为假手术组、缺血再灌注6,12,24和48h5组,每组6只小鼠。方法:缺血再灌注的4组小鼠夹闭双侧颈总动脉20min后再通血流,建立前脑缺血再灌注动物模型,分别于再灌注6,12,24及48h取脑海马;假手术组不夹闭颈总动脉,24h后取脑海马。用蛋白免疫印迹法测定脑海马中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3酶原表达的变化。主要观察指标:各组小鼠脑海马半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3酶原总量,及其磷酸化和去磷酸化水平比较。结果:经补充后30只小鼠进入结果分析。①脑海马区总半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3酶原水平:缺血再灌注12,24h组显著高于假手术组(9133.1±2216.3,9355.9±1901.6,P<0.05)。②去磷酸化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3酶原水平:缺血再灌注24h组显著高于假手术组(7812.0±1625.1,3825.8±155.6,P<0.05)。③磷酸化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3酶原水平:各组与假手术组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:结果提示脑缺血再灌注损伤诱发半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3酶原表达增加;其中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3酶原去磷酸化水平升高明显,说明脑缺血再灌注损伤可能诱发半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3酶原去磷酸化,继而促进其转化为活性形式。
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